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RIPA裂解液

产品介绍：
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，本产品RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS 以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA 等多种磷酸酶抑制剂。

产品储存：常温运输，短期常温保存，长期保存4℃。

注意事项：
1.裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
2.用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入leupeptin，aprotinin等其它抑制剂。
3.裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前应该37℃-60℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用。
4.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
1.对于培养细胞样品：
1)取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2)对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
3)对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万个细胞/管，然后再裂解。 
4)充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2.对于组织样品：
1)把组织剪切成细小的碎片。 
2)取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3)按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 
4)用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5)充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。