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你只有了解下面操作步骤才能成功RNA提取
来源:Genenode|君诺德公司     发布时间:2018-06-26     Hits:1005
      你是不是和上面的师弟有相同的苦恼,搞不定RNA这个磨人的小妖精,经常出现辛辛苦苦提的RNA又降解了,质检又没通过的情况。为什么提的RNA总是不合格? 今日作为师姐的小编就给我们整理一下RNA提取时的注意事项,轻松帮你搞定傲娇的RNA分子,So easy~
为什么RNA易降解?
RNA简略降解有内因也有外因,从本身结构来说RNA是单链分子,本身很不安稳,别的RNA分子2’方位上有游离的羟基,易构成2’,3’-环形磷酸盐中心产品,易分化。从外因来看RNase无处不在,并且RNase本身热安稳性高、不简略失活。RNase就像坚强的小强,怎样打都不死。
RNA提取注意事项
     1:资料的取用与保存
取用准则:“现用现取”,资料离体后赶快进行RNA提取。
 保存条件:液氮、-80℃冰箱、干冰。
 保存作用:液氮> -80℃冰箱>干冰。
 样品分装:按试验需求最小量保存多份,防止重复冻融。
     2:试验器具使用
在RNA提取进程中但凡与RNA接触到的器皿都必须是RNase-free的,具体可通过以下两种办法取得:
DEPC处理失活RNase:用含有DEPC的水浸泡试验器皿失活RNase,然后进行高温灭菌。
直接购买RNase-free的试验耗材:适用于经费足够的试验室,定心可靠。
    3:提取办法挑选
RNA提取最常用的是TRIzol法和试剂盒法,二者各有好坏,可根据研讨意图进行挑选。
试剂盒法:
长处:操作简略、入门简略,新手必备。
缺陷:柱提取法提取的RNA有长度的局限性, 小RNA在提取进程中简略丢掉。别的,不同的试剂盒适用物种不同,使用时需谨慎挑选。
TRIzol法:
长处:提取成本低,适用物种广泛,操作者可根据不同试验资料的特色灵敏调整试验进程达到最优的提取作用,适用于经验丰富的科研老司机。
缺陷:操作进程繁琐、耗时长。
    4:试验人员操作
提取RNA时应配戴口罩和手套,防止皮肤上的RNase污染样品。
试验进程遵循操作快、加样准的准则。
主张提取经验不足的试验人员防止一次性操作几十个RNA样品,简略造成不同样品间的平行性差,别的,操作时刻添加也会添加RNA降解的危险。
    5:RNA试验环境建立
    最好建立RNA专用的试验环境包含试验台和离心机等,削减不同试验环境下RNase的穿插污染。
防止将RNA长时刻暴露于高温环境。通常情况下,RNA 分子本身常常发作折叠构成安稳二级结构,防止被降解,高温环境有助于RNA分子二级结构的翻开,使RNA变得不安稳,因而要防止。

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