咨询热线:400-167-8986

联系我们

Q Q:11955 37948
电话:400-167-8986
手机:185 1867 6727

订货:order@genenode.com
技术:service@genenode.com
网址:www.genenode.com

公众号:genenode

第二代昆虫杆状病毒表达系统BEVS
来源:Genenode|君诺德公司     发布时间:2019-05-08     Hits:1508

昆虫杆状病毒表达系统BEVS介绍

     昆虫杆状病毒表达系统(Baculovirus Expression Vector System-BEVS)  广泛应用于科研和工业生产领域。与其他常用的重组蛋白表达系统相比,昆虫杆状病毒表达系统具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性等优势,表达的重组蛋白通常具有正确的翻译后修饰和生物学活性,如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。同时昆虫细胞悬浮生长,容易放大培养,有利于大规模表达重组蛋白。

 

      Genenode君诺德公司,国内独家提供自产的第二代昆虫杆状病毒表达产品Super ibac,包括杆状病毒DNA(Super ibac DNA),转移载体(pIAT),对照转移载体(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit。相较于其他类似产品,我们价格更优惠,供货更迅速,同时还可以提供更快速、高效、经济的昆虫杆状病毒表达重组蛋白服务,自主研发生产的杆状病毒表达试剂盒可以达到更高的重组蛋白表达水平,经验丰富的技术人员能够为您推荐最适合的服务,迅速解决在表达纯化过程中遇到的问题。

技术原理:

Super iBac系统是一个全新的生产重组杆状病毒的技术平台,免去了从亲代病毒中筛选重组病毒的步骤,不需要进行空斑实验,一步法杆状病毒蛋白表达系统,是目前最领先的杆状病毒表达系统。

 

通过对杆状病毒DNA的复制必需基因进行修改,使其不能在昆虫细胞中正常复制,只有和对应的转移载体同源重组,修复其复制必需基因,才能在昆虫细胞中进行复制,只有当Super ibac DNA和携带目的基因的转移载体pIAT成功同源重组后,才能在昆虫细胞中复制存活,因此共转染昆虫细胞后无需任何筛选,重组率为100%,一步法转染,简单快速,尤其经过基因改造后,重组蛋白更稳定,蛋白生物活性更高,适合分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等难表达的蛋白。

 

Super ibac昆虫杆状病毒表达系统技术特点:

1.重组蛋白表达水平高(最高可达细胞总蛋白的50%),大多数为有生物功能的可溶性蛋白;

2.真核表达系统,重组蛋白生物学活性高,能同时表达多个外源基因;

3.可进行翻译后修饰:磷酸化修饰, 形成正确折叠的二硫键, 进行N-和O-型糖基化修饰

4.表达人源化蛋白,昆虫细胞中糖基化途径克服人源糖蛋白的问题。

5.大多数昆虫细胞系在不加血清培养基中快速生长,得到高滴度病毒和高产量重组蛋白;

6.相对于其他真核表达系统成本较低,硬件设施成本低接近于原核表达,无需CO2培养箱,无需血清培养基;

7.规模化培养简单经济,适合自动化生产,昆虫细胞比哺乳动物细胞操作简单;

8.商业化的BEVS系统让病毒重组及蛋白表达变得更简单;

 

不同蛋白表达系统的比较:

 

优点

缺点

大肠杆菌

      遗传背景清楚、培养费用低、耐受能力强、抗污染
      能力强、稳定   性好、适用范围广

     缺乏蛋白质翻译后加工机制;

     目的蛋白常以包涵体形式释放,产物纯化
     困难,表达的蛋白生物活性低

枯草芽孢杆菌

     很强的胞外分泌能力;

     目的蛋白能以可溶的活性形式高产量地分泌到培养基中

    蛋白表达过程中枯草芽孢杆菌会分泌
    一些蛋白酶降解目的蛋白,表达量低于
    大肠杆菌表达系统

哺乳动物细胞

     表达的蛋白能进行翻译后修饰并正确的折叠;
     能组成性或诱导性地表达目的蛋白;
     目的蛋白更接近天然状态,适用于表达完整的大分子

    表达量低、操作繁琐、成本较高、
    不适合用于蛋白大规模生产

酵母细胞

     生长繁殖速度快,培养条件普通,可大规模生产,
     成本相对低

     能够得到折叠及修饰后的蛋白质

     高水平表达蛋白质

     可克服异源蛋白降解

         大多的重组蛋白表达效率较低、
         过度糖基化

昆虫杆状病毒

     高效重组:重组率100%

     能同时表达多个外源基因

     表达产量高,超过50%蛋白可被表达

     可进行翻译后的各种修饰

    相比如其他表达系统,该系统成本低,硬件设施要求低,     无需CO2培养箱,无需血清培养基

    培养简单经济,适合自动化生产

 



  不同杆状病毒表达系统的比较

                                                                    不同杆状病毒表达系统的比较


杆状病毒表达系统介绍(BEVS)

第一代表达系统:

Bac-to-Bac

1.需要先在大肠杆菌系统中生产重组病毒, 筛选纯化后再转染昆虫细胞;

2.重组效率非常低,大量筛选工作。

第一代表达系统:

BacPAK6/BaculoGold

1.将杆状病毒DNA线性化, 引入多个Bsu361限制性酶切位点;

2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之线性化, 重组病毒仍需要进行空斑筛选。

第一代表达系统:

BaculoDirect

1.杆状病毒DNA线性化;

2.需要利用更昔洛韦(核苷类似物)筛选重组病毒,对细胞有毒性;

3.重组效率低,需要好几轮的扩繁。

第二代表达系统:

iBac(Genenode)

1.高效重组:重组率100%,经基因改造,仅重组病毒才能成活,无需加抗生素和任何筛选工作;

2.蛋白质量高:经基因改造,提高分泌蛋白效率,重组蛋白更稳定,蛋白生物活性更高;

3.适用于难表达的蛋白:分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白;

 

转染GFP基因:

转染GFP基因 Bac-Bac 

杆状病毒宿主细胞:

细胞系

来源

应用

培养基

Sf-9

Spodopterafrugiperda

Sf-9 (Pupal ovarian tissue)

重组杆状病毒生产

胞内蛋白表达

空斑分析

Sf-900II/III SFM

HyQ SFX

Sf-21

Spodopterafrugiperda

Sf-21 (Pupal ovarian tissue)

胞内蛋白表达

重组分泌蛋白

Sf-900II/III SFM

ESF-921

HyQ SFX

Hi-5

Trichoplusiani

Hi-5 (Ovarian cells)

重组分泌蛋白

EX-CELL 405

Express Five SFM

HyQ SFX

Tri-Ex

Sf-9 derivative

胞内蛋白表达

TriEX

 

杆状病毒DNA的选择:

杆状病毒DNA

特点

Super ibac S DNA

适合常规蛋白表达,尤其适合糖基化蛋白,分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等难表达的蛋白。

Super ibac P DNA

专门开发用于表达蛋白生产病毒颗粒(VLP),也适用于胞质蛋白的表达。

 

产品线(具体请询价):

货号

产品名称

产品规格

备注

202818

Super ibac S DNA Kit

5rnx

试剂盒(all-in-one kit)

200818

Super ibac S DNA

5rnx

杆状病毒DNA

201801

pIAT1

3 ug

转移载体

201802

pIAT2

3 ug

转移载体

201803

pIAT GFP

3 ug

对照转移载体

202816

Super ibac P DNA Kit

5rnx

试剂盒(all-in-one kit)

200816  

Super ibac P DNA

5rnx

杆状病毒DNA