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实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

1M Tris-HCl(pH7.4，7.6，8.0)

□组份浓度 1 M Tris-HCl

□配制量   1L

□配制方法 

1.称量121.1 gTris置于l L烧杯中。

2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。

pH值	浓HCl
7.4	约70 ml
7.6	约60 ml
8.0	约42ml

4.将溶液定容至1 L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl(pH8.8)         

□组份浓度  1.5 M Tris-HCl

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量181.7 gTris置于1 L烧杯中。

2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓HCl调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1 L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

 

1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)        

□组份浓度 100 mMTris-HCl，10 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。

1 MTris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)	100 ml
500 mMEDTA(pH8.0)	20 ml

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

 

1 ×TE Buffer (pH8.0)        

□ 组份浓度  10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA

□ 配制量   1 L

□ 配制方法  1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。

1 MTris-HCl Buffer(pH8.0)	100 ml
500 mMEDTA(pH8.0)	20 ml

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)           

□组份浓度 3 M醋酸钠

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.称量40.8 gNaOAc·3H2O置于100~200 ml烧杯中，加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。

3.加去离子水将溶液定容至100 ml。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

PBS Buffer       

□组份浓度 137 mMNaCl，2.7 mMKCl，10 mMNa2HPO4，2 mMKH2PO4

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

NaCl	8 g
KCl	0.2 g
Na2HPO4	1.42 g
KH2PO4	0.27 g

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mMCaCl2和0.5 mMMgCl2。

10 M醋酸铵   

□组份浓度 10 M醋酸铵

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100 ml。

3.使用0.22 µm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶，室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚   

□配制方法  

1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1 MTris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1 MTris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)

□配制方法 

1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 

2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

10% (W/V) SDS   

□组份浓度  10%(W/V)SDS

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.称量10 g高纯度的SDS置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100 ml后，室温保存。

2 N NaOH   

□组份浓度  2 N NaOH

□配制量    100 ml

□公式      m=CVM=（2 mol/l *0. 1L*40 g/mol）=8 g

□配制方法  

1.量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2.称取8 gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

注意：N是当量浓度。对于一价酸碱来说，1N=1M。对于二价或者高价的酸碱来说，摩尔浓度=当量浓度/价数。比方说1M的硫酸是2N，当量=摩尔*价态，对于硫酸来说1 mol/L=2 N。

2.5 N HCl

□组份浓度  2.5 N HCl

□配制量    100 ml

□公式      m=CVM

□配制方法 

1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N)，均匀混合。

2.室温保存。

5 M NaCl   

□组份浓度 5 MNaCl

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量292.2 gNaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。   

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

20% (W/V) Glucose(葡萄糖)

□组份浓度  20% (W/V) Glucose

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.称取20 gGlucose置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后。搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至l 00 ml。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

Solution l (质粒提取用)

□组份浓度 25 mMTris-HCl(pH8.0)，10 mMEDTA，50 mMGlucose

□配制量   1 L

□配制方法  

1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。

1 MTris-HCl(pH8.0)	25 ml
0.5 MEDTA(pH8.0)	20 ml
20% Glucose(1.11 M)	45 ml
dH2O	910 ml

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

SolutionⅡ(质粒提取用)

□组份浓度 200 mMNaOH，1%(W/V)SDS

□配制量    500 ml

□配制方法  

1.量取下列溶液，置于500 ml烧杯中。

10% SDS	50 ml
2N Na0H	50 ml

2.加灭菌水定容至500 ml，充分混匀。

3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

SolutionⅢ(质粒提取用)

□组份浓度 3 MKOAc，5 MCH₃COOH (ethanoic acid=acetic acid)

□配制量    500 ml

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

KOAc醋酸钾	147g
CH₃COOH乙酸	57.5ml

2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500 ml。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

0.5 MEDTA (pH8.0) 

□组份浓度 0.5 MEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称取186.1 gNa2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值至8.0(约20g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1 L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。 

1 MDTT   

□组份浓度 1 MDTT

□配制量    20 ml

□配制方法  

1.称取3.09 gDTT，加入到50 ml塑料离心管内。

2.加20 ml的0.01 MNaOAc(pH5.2)，溶解后使用0.22 µm滤膜过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

10 mM ATP   

□组份浓度 10 mMATP

□配制量    20 mL

□配制方法  

1.称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

2.加20 ml的25 mMTris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20℃保存。