客户中心

蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

30% (W/V) Acrylamide(丙烯酰胺)

□组份浓度  30%(W/V)Acrylamide

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

Acrylamide	290 g
BIS(双丙烯酰胺)	10 g

2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

40% (W/V) Acrylamide(丙烯酰胺)

□组份浓度  40% (W/V) Acrylamide

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

Acrylamide	380 g
BIS	20 g

2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

10% (W/V) AP (过硫酸铵)

□组份浓度  10%(W/V)AP过硫酸铵

□配制量    10 ml

□配制方法  

1.称取1 g过硫酸铵AP。

2.加入10 ml的去离子水后搅拌溶解。

3.贮存于4℃。

注意：10%过硫酸铵溶液在4℃保存时可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。

5×Tris-Glycine Buffer(SDS-PAGE电泳缓冲液)

□组份浓度 0.125 MTris，1.25 MGlycine(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

Tris	15.1 g
Glycine	94 g
SDS	5.0 g

2.加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。

2×SDS-PAGE Loading Buffer

□组份浓度

100 mM	Tris-HCl(pH6.8)
100 mM	β-巯基乙醇(2-ME)
4%(W/V)	SDS
0.2%(W/V)	溴酚兰(BPB)
20%(V/V)	甘油

□配制量    5 ml

□配制方法  

1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。

0.25 MTris-HCl(pH6.8)	0.25 ml
β-巯基乙醇	0.5 ml
SDS	0.2 g
甘油	1 ml
1%溴酚兰	0.1 ml，

2.加去离子水溶解后定容至5 ml。

3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。

4.加入β-巯基乙醇 的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右

5×SDS-PAGE Loading Buffer

组份浓度

250 mM	Tris-HCl(pH6.8)
10%(W/V)	SDS
0.5%(W/V)	BPB
50%(V/V)	甘油
5%(V/V)	β-巯基乙醇(2-ME)

配制量    5 ml

配制方法  1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。

1 MTris-HCl(pH6.8)	1.25 ml
SDS	0.5 g
BPB	25 mg
甘油	2.5 ml

2.加去离子水溶解后定容至5 ml。

3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。

4.使用前将25 µl的2-ME加到每小份中。

5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。

考马斯亮蓝R-250染色液

□组份浓度  0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250,25%(V/V)异丙醇,10%(V/V)冰醋酸

□配制量   1 L

□配制方法 

1.称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。

2.量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。

3.加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。

4.加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。

5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。

考马斯亮蓝染色脱色液    

 □组份浓度   10%(V/V) Ethanoic acid醋酸，5%(V/V)乙醇

 □配制量    1 L

 □配制方法   

1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。

Ethanoicacid醋酸	100 ml
5% (V/V)乙醇	50ml
dH2O	850ml

2.充分混合后使用。

凝胶固定液(SDS-PAGE银氨染色用)

□组份浓度   50%(V/V)甲醇，10%(V/V) Ethanoic acid 醋酸

□配制量     1L

□配制方法   

1.量取下列试剂，加入1L的试剂瓶中。

甲醇	500 ml
Ethanoicacid	100 ml
dH2O	400 ml

2.均匀混合后室温保存。

凝胶处理液(SDS-PAGE银氨染色用)

□组份浓度   50%(V/V)甲醇，10%(V/V)戊二醛

□配制量     100 ml

□配制方法   

1.量取下列试剂，加入100~200 ml的试剂瓶中。

甲醇	50 ml
戊二醛	10 ml
dH2O	40 ml

2.均匀混合后室温保存。

凝胶染色液(SDS-PAGE银氨染色用)

□组份浓度   0.4%（W/V）AgNO3, 1%（V/V）浓氨水（浓NH3·H2O）, 0.04%（W/V）NaOH

□配制量     100 ml

□配制方法   

1.量取下列试剂，加入100~200 ml的试剂瓶中。

20% AgNO3	2 ml
浓NH3·H2O	1 ml
4% NaOH	1 ml
dH2O	96 ml

2..均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。

3.本染色液应现用现配，不宜保存。

显影液  (SDS-PAGE银氨染色用)

□组份浓度   0.005%(W/V)柠檬酸，0.02%(V/V)甲醛

□配制量    1 L

□配制方法   

1.称量下列试剂，置于l L试剂瓶中。

柠檬酸	50 mg
甲醛	0.2 ml

2.加入1 L去离子水后，摇动混合溶解。

3.室温保存。