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核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

50×TAE Buffer  (pH8.5)

□组份浓度 2 MTris-醋酸，100 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

Tris	242 g
Na2EDTA·2H2O	37.2 g

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。

4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×TBE Buffer  (pH8.3)

□组份浓度 890 mMTris-硼酸，20 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

Tris	108 g
Na2EDTA·2H2O	7.44 g
硼酸	55 g

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 

□组份浓度  200 mM MOPS，20 mMNaOAc，10 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.称41.8 gMOPS，置于1 L烧杯中。

2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。

3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。

4.再向溶液中加入下列试剂。

1 MNaOAc(DEPC处理)	20 ml
0.5 MEDTA(pH8.0)(DEPC处理)	20 ml

5.用DEPC处理水将溶液定容至1 L。

6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。

7.室温避光保存。

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。

溴乙锭  (10 mg/ml)

□组份浓度  10 mg/ml溴乙锭

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。

2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。

3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。

4.溴乙锭的工作浓度为0.5 ug/ml。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。

Agarose凝胶

配制方法  

1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。

2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。

3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。

   注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。

4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。

5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5 µg/ml)。并充分混匀。

   注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。

6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度  一般在3~5 min之间。

7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。

   注:凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃保存,一般可保存2~5天。

琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围

琼脂糖浓度	最佳线形DNA分辨范围(bp)
0.5%     0.7%     1.0%     1.2%     1.5%     2.0%	1,000~30,000     800~12,000     500~10,000     400~7,000     200~3,000     50~2,000

6× Loading Buffer(DNA电泳用)

□组份浓度

30 mM	EDTA
36%(V/V)	Glycerol
0.05%(W/V)	Xylene Cyanol FF
0.05%(W/V)	Bromophenol Blue

□配制量    500 ml

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

EDTA	4.4g
Bromophenol Blue	250 mg
Xylene Cyanol FF	250 mg

2.向烧杯中加入约200 ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。

3.加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH值至7.0。

4.用去离子水定容至500 ml后，室温保存。

10 × Loadlng Buffer(RNA电泳用)

□组份浓度

10 mM	EDTA
50%(V/V)	Glycerol
0.25%(W/V)	Xylene Cyanol FF
0.25%(W/V)	Bromophenol Blue

□配制置    10 ml

□配制方法  

1.称量下列试剂，置于10 ml离心管中。

0.5 MEDTA(pH8.0)	200 µl
Bromophenol Blue	25 mg
Xylene Cyanol FF	25 mg

2.向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。

3.加入5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混匀。

4.用DEPC处理水定容至10 ml后，室温保存。