技术服务

服务介绍：

ELISA检测是免疫检测中的一项重要技术，该法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及可自动化操作等特点。目前已广泛应用于临床检测及研究领域。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。ELISA方法也合适用于经mRNA表达谱芯片、蛋白芯片或蛋白质组学（质谱）等实验找出差异蛋白后，进一步验证差异蛋白。

间接法ELISA检测：用特异性抗原包被固相载体，加入待测的抗体样品反应后，再加入酶标二抗，经底物显色后测定。

夹心法ELISA检测：用第一抗原或抗体包被固相载体，加入待测的抗体或抗原反应后，再加入酶标的第二抗原或抗体，经底物显色后测定，即可计算出待测抗原的量。此方法所用抗原一般为大分子抗原，如蛋白等，不适用于多肽等半抗原。

竞争法ELISA检测：用特异性抗体包被固相载体，同时加入酶标抗原和待测抗原的混合物样本，待测抗原将与酶标抗原竞争与固相上抗体结合。经底物显色后测定，计算两组数值之差即可推出待测抗原的量。此方法常用于测定小分子抗原。

服务内容：
提供间接法ELISA检测、夹心法ELISA测定和竞争法ELISA测定。
 
样品要求：
1.客户提供含待测样品的标本（血清、血浆等），我们根据客户的需要（定性、定量）制定技术服务路线。
2.需提供待检测抗体和包被用抗原。
3.检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆时，样本收集后应立即-20度保存，若长期保存应-80度保存。
4.样本量的要求：若一个指标做复孔检测应不少于250ul，做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足最好提供500ul以上。
5.客户的样本收集后，立即按要求保存，切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输，邮寄前请与技术支持沟通确认。

送样运输要求：
1、动植物组织样本(干冰运输)：
准确称取动物组织重量按重量(mg)：体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。
2、血清样本(干冰运输)：
全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于2-8℃ 3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。
3、血浆样本(干冰运输)：
可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。
4、细胞样本：
贴壁细胞：将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。
悬浮细胞：将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。
细胞上清：标本于2-8℃，3000转/分离心15min取上清，上清立即用于实验，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。

实验流程(具体步骤以试剂盒说明书为准):
1.样本准备：血清、血浆、组织匀浆、细胞上清;
2.操作步骤：
处理样本配制标准品—加样(标准品及样本)—洗板，加检测抗体溶液，孵育—洗板，加酶溶液，孵育— 洗板，加TMB底物— 加终止液50ul，立即450nm读数(双抗夹心法)
处理样本配制标准品—加样(标准品及样本)—加酶溶液—加检测抗体— 混匀孵育— 洗板，加TMB显色— 加终止液50ul，立即450nm读数(竞争法)
3.实验结果：有样本OD值代入标曲中计算出浓度，结果以EXCEL形式发出。

实验结果展示：

ELISA检测（代测），360元/次/96T