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人乳头瘤病毒基因分型（28型）检测试剂盒

临床背景介绍：

人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）属于乳头瘤病毒科，是一种小分子的、无被膜包被的环状双链DNA病毒。HPV通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。对于感染生殖道和肛门的HPV，根据各基因型别致病力大小或致癌危险性大小可分为低危型和高危型两大类。而持续性的高危型HPV感染则是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要原因。全球范围的研究结果显示，在99.7%的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在。低危型HPV一般与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变相关，极少引起浸润癌。

依据WHO国际癌症研究机构（IARC）及其他国际组织的研究成果，将HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13种基因型列为高危型别，26、53、66、73、82等5种基因型列为中等风险型别。根据《人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型、试剂技术审查指导原则》的要求，本试剂盒只针对用于宫颈癌相关预期用途的（上述18种）HPV基因型核酸检测。

多年来，国际上通用的宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的诊断主要遵循“三阶梯式”诊断程序，即宫颈细胞学、阴道镜及组织病理学检查。宫颈细胞学检查是普遍应用的宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的筛查方法，可发现早期病变。但宫颈细胞学检查存在其固有的局限性。高危型HPV检测用于宫颈细胞学检查异常患者的分流及宫颈癌筛查，可有效地增加宫颈病变检出率，提高细胞学检查敏感性，并降低筛查频率。

检验原理：
本产品采用 PCR 法扩增待测样品中提取得到的 HPV DNA 基因片段,通过把约200bp的PCR 产物与 HPV 芯片及相关反应液之间进行一步法混合反应,然后直接显色后进行结果判读,从而实现对 HPV 基因型别的检测,主要检测 L1 区的 28 种高危型别。

利用HPV的L1基因序列的特点设计了通用引物，能够扩增出18种高危HPV基因型的目的片段。HPV 芯片上固定了28种高危型的分型探针、1个芯片检测质控探针HC和1个全程检测内控探针PC（actin基因能够监控包括样本质量、PCR反应等步骤）。本试剂盒还包括2个阳性对照品（分别对应2种HPV基因型片段）和1个阴性对照品。PCR 反应体系中配有 dUTP/UDG ,可预防非特异性 PCR 扩增和污染,减少假阳性出现的概率。

HPV DNA检测的意义：
1.HPV感染是引起宫颈癌的主要病因。
2.HPV感染→HPV持续感染+其它致癌因素→宫颈上皮细胞病变→子宫颈癌前病变→子宫颈癌
3.宫颈癌筛查最佳整体解决方案：HPV检测+液基细胞学检查。

高危型HPV的持续感染导致宫颈癌发生，基因检测早于细胞！

HPV基因检测比传统的宫颈癌筛查方法更早发现宫颈癌前病变，可以起到预防的作用，这样有利于宫颈癌癌前病变的早发现、早诊断、早治疗。

HPV分型检测的临床价值：
1.不同高危型HPV型别致癌风险不同，以HPV16、18、33、58型致癌风险最高，通过分型检测对患者进行风险评估，制定治疗方案。
2.同一高危型HPV的持续感染致癌风险最高，通过分型检测判断患者是否同一基因型的持续感染，对患者进行风险评估治疗。不分型检测则不能判断高危型阳性是否同一基因型引起。
3.治疗前后的HPV分型检测，可判断是否治疗彻底还是重新感染。
4.而HPV不分型检测，由于不同型别的基因序列之间常常非常接近，在检测某些高危型的HPV时，常常会把一些序列接近的低危型HPV误认为是高危型，从而带来假阳性的结果。

预期用途：
本试剂盒适用于体外定性检测宫颈脱落细胞样本中高危型的人乳头瘤病毒(HPV)核酸 DNA 的存在及具体基因型,其可检测的HPV型别包括28种基因型：HPV-16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68，73，82，26，53，6，11，40，42，43，44，54，61，70，90。

在临床上用于：筛查宫颈细胞学检查为 ASC-US(意义未确定的非典型鳞状上皮细胞)结果的患者,以确定是否需要进行阴道镜检查(即 ASC-US 人群分流用途)。

本试剂的检测结果应结合宫颈细胞学及其他医学检查结果进行综合分析,不得单独作为患者管理的依据。

本试剂盒仅供科研使用。

产品特点：
1.操作步骤简单，检测耗时短，检测结果易于长期保存：
快速核酸提取，一步法PCR扩增，PCR产物无需变性，直接HA检测：反应、洗涤、显色， 30min出结果。
2.设备要求简单，无需专门配套仪器：只要普通PCR仪，水浴锅，摇床即可满足需要。
3.适用多种样本形式：TCT保存液、LCT保存液、生理盐水、石蜡包埋组织均适用。
4.所有试剂绿色环保：不含有毒有害及腐蚀性的液体，绿色安全环保。
5.检测型别众多：包括临床最常见，最有医学意义的28个HPV型别（包括18个高危型和10个低危型），且能检测多型别的混合感染。
6.全程质控检测：包括质控核酸样本质量、PCR反应、HA反应全程的PC探针体系，以及单独质控HA反应步骤的HA探针体系。
7.无与伦比的分型特异性：所检28个型别之间不存在任何交叉、与不在检测范围之内的其他型别之间也不存在交叉。
8.灵敏度高：能够检出103拷贝数/每个样本（以质粒衡量）。
9.检测性能稳定，重复性好，结果判读简单明了，检测通量巨大。
10.通过专门设计，有效消除不同型别之间的检测灵敏度的差异化  常规基于PCR的HPV分型方法存在一个明显缺陷：不同型别之间的检出灵敏度差异达到1~3个数量级，而且检测型别越多，灵敏度越低，特异性越差，而本技术检测不同型别间灵敏度高度均一化。

实验仪器：
普通PCR仪，恒温水浴锅，摇床。

样本要求：
样本：妇女宫颈脱落细胞。
采集：按照临床样本采集标准程序进行，同时避免经期采集。
存放：对宫颈脱落细胞样本自取样之日起室温可存放2周，2～8℃可存半年，-18℃以下可存1年，冻存的样品不宜反复冻融。

样品运输要求：常温运输即可，蓝冰运输更佳。

下列样本应拒收：
（1）采集后未及时检测，未按上述存放要求保存标本；
（2）经期采集的样本；
（3）由于其他原因导致DNA已降解的样本。

                                                                  HPV芯片探针排布图

温馨提示：不可用于临床治疗。

具体产品价请邮件或电话咨询！