产品中心

RT-nfo RNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型)

包装规格：

A4613-50

RT-nfo RNA恒温快速扩增试剂盒(试纸条型)

48T

2100元

用于RNA扩增，试纸条检测

配套使用产品：

编号	产品名称	规格	价格
A4603-48	nfo-DNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型)	48T	2000
A4613-50	RT-nfo RNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型)	48T	2100
A4631-50	LFD一次性核酸检测试纸条(单标)	50T	1500
A4632-50	LFD2一次性核酸检测试纸条(双标)	50T	2000
A4634-50	LFD-ECS1防核酸污染一次性核酸检测试纸条(单标)	50T	3600
A4635-50	LFD-ECS2防核酸污染一次性核酸检测试纸条(双标)	50T	4200

一. 原理概述：

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，特殊修饰的反转录酶利用特异性引物和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。依赖nfo酶的作用，加入根据模版设计的特异的分子探针，使用胶体金技术（三明治夹心法）可以对最终结果进行检测。

二. 产品特点：
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需12 mins）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。
本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

三. 引物设计：
1. 建议使用长度在 30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；
2. 碱基排布随机性高，GC 含量在 30%-70%之间；
3. 下游引物的5’端标记一个修饰基团（常用生物素Biotin）；
4. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增；
5. 扩增子长度建议在150-300 bp，通常不超过500 bp。

四. 荧光探针设计：
在上下游引物中间，设计一段长度为 46-52nt 与目的片段互补的序列作为胶体金探针；
探针序列不与特异性引物识别位点重叠，长度为 46-52 nt，序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。

探针共有三个修饰位点：
1. 5’端修饰一个抗原标记（FAM）；
2. 在距 5’端约 30nt 序列位置上标记一个 dSpacer（四氢呋喃，THF），作为 nfo 的识别位点；

3. THF 距离 3’末端约 15 nt，并且 3’末端标记一个修饰基团，例如胺基、磷酸基团或 C3-spacer。

五. 试剂盒储存：
运输条件：低温运输；
储存条件：储存温度 ≤ -20 ºC，避光保存，避免重压、反复冻融；
产品有效期：12个月。 

六. 操作步骤：
提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。

1).每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2).每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针（引物和探针浓度为10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；

3).向反应管中依次加入7 μL ddH2O和3 μL核酸RNA模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为13.5 μL）；

4).最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（对于多个反应，建议将B buffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀）；

5).混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育8-12 mins；

6).反应结束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中，混合均匀后，将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡，5 mins内观察质控线与检测线判读结果。