咨询热线:400-167-8986

联系我们

Q Q:11955 37948
电话:400-167-8986
手机1:185 1867 6727
手机2:173 0710 7886
订货:order@genenode.com
技术:service@genenode.com
网址:www.genenode.com

1

RT-nfo RNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型)

产品编号:RT-nfo

产品规格:48T

产品价格:2500

包装:

储存条件:-20℃

  • 产品介绍
  • 相关产品
  • 技术文章
  • 文档下载

RT-nfo RNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型)

用于RNA扩增,试纸条检测


一. 原理概述:

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,特殊修饰的反转录酶利用特异性引物和模板RNA合成cDNA链,反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。依赖nfo酶的作用,加入根据模版设计的特异的分子探针,使用胶体金技术(三明治夹心法)可以对最终结果进行检测。

二. 产品特点:
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需12 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。
本试剂对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

三. 引物设计:
1. 建议使用长度在 30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;
2. 碱基排布随机性高,GC 含量在 30%-70%之间;
3. 下游引物的5’端标记一个修饰基团(常用生物素Biotin);
4. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增;
5. 扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp。

四. 荧光探针设计:
在上下游引物中间,设计一段长度为 46-52nt 与目的片段互补的序列作为胶体金探针;
探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为 46-52 nt,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。

探针共有三个修饰位点:
1. 5’端修饰一个抗原标记(FAM);
2. 在距 5’端约 30nt 序列位置上标记一个 dSpacer(四氢呋喃,THF),作为 nfo 的识别位点;

3. THF 距离 3’末端约 15 nt,并且 3’末端标记一个修饰基团,例如胺基、磷酸基团或 C3-spacer。


五. 试剂盒储存:
运输条件:低温运输;
储存条件:储存温度 ≤ -20 ºC,避光保存,避免重压、反复冻融;
产品有效期:12个月。 

六. 操作步骤:
提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1).每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2).每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3).向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);
4).最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5).混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育8-12 mins;
6).反应结束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中,混合均匀后,将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡,5 mins内观察质控线与检测线判读结果。