咨询热线:400-167-8986

联系我们

Q Q:11955 37948
电话:400-167-8986
手机1:185 1867 6727
手机2:173 0710 7886
订货:order@genenode.com
技术:service@genenode.com
网址:www.genenode.com

1

多功能DNA纯化回收试剂盒

在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。

产品编号:2305

产品规格:100次/200次

产品价格:560/980

包装:

储存条件:4℃

  • 产品介绍
  • 相关产品
  • 技术文章
  • 文档下载

多功能DNA纯化回收试剂盒(离心柱型)


包装规格:

2305A 多功能DNA纯化回收试剂盒(离心柱型) 50次 350元
2305B 多功能DNA纯化回收试剂盒(离心柱型) 100次 560元
2305C 多功能DNA纯化回收试剂盒(离心柱型) 200次 980元
2305DM 多功能DNA纯化回收试剂盒(离心柱型) 100次 760元


一.产品介绍:
在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。

二.产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方,将溶胶和结合两种功能统一,因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况,节省了需购买多种试剂盒的费用。
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。


三.适用范围:
    适用于琼脂糖凝胶DNA回收、PCR反应产物纯化回收、酶切产物DNA片断纯化回收、探针标记后纯化回收、DNA样品浓缩等。

四.储存条件:
1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。
2.储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

五.注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.溶胶液/结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3.回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间,过长、过短片段的回收效率迅速降低。
4.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15μg, 100bp-5kb的DNA片段,回收率可高达85%-95%。
5.切胶回收时,紫外灯观察对DNA片段有损坏作用,应该尽可能使用能量低的长波紫外线,并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。


关于平衡液的使用
1.介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。
2.使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取100μl的平衡缓冲液至柱子中。13000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

六.操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
  提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1.琼脂糖凝胶DNA回收:
1.在长波紫外灯下,用干净刀片将所需回收的DNA条带切下,尽量切除不含DNA的凝胶,得到凝胶体积越小越好。


2.将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管,称重。
先称一个空1.5ml离心管重量,然后放入凝胶块后再称一次,两次重量相减,得到凝胶的重量。


3.加3倍体积溶胶/结合液DB。
如果凝胶重为100mg,其体积可视为100μl,则加入300μl溶胶液。
如果凝胶浓度大于2%,应加入6倍体积溶胶液。


4.56℃水浴放置10分钟(或直至胶完全溶解)。每2-3分钟涡旋震荡一次加速溶解。


5.可选,一般不需要:每100mg最初的凝胶重量加入150μl的异丙醇,震荡混匀。
有时候加入异丙醇可以提高回收率,加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时,不加入异丙醇,加入有时反而可能降低回收效率。


平衡液预处理吸附柱:
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见前文“关于平衡液的使用”


6.将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。
过滤下的溶胶/结合液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后,溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色,此为酚红PH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。


7.加入600μl漂洗液WB (请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。


8.加入600μl漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。 


9.将吸附柱EC放回空收集管中,12,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。


10.取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加50μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多量DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。


洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于25μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少产量。


2.PCR产物或者酶切片段等DNA纯化:
1.每100μl PCR扩增后体系或者酶切后体系加入500μl溶胶/结合液DB,充分混匀。(如果初始体系小于100μl,请事先用双蒸水调整至100μl)。


2.将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。


3.从此步骤开始和琼脂糖凝胶DNA回收的操作步骤7-10完全一致,请参见琼脂糖凝胶DNA回收的操作步骤7-10。