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小鼠杂交瘤单抗定制服务

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动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,重排后具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。应用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,通过HAT筛选,ELISA抗体检测,有限稀释克隆化,选择出具有分泌抗体功能又能无限繁殖的来源于单一B细胞的杂交瘤细胞。该细胞分泌产生非常均一的、其结构、氨基酸顺序都是一致的,且只针对一种抗原决定簇的高特异性抗体,这就是单克隆抗体。


单抗的最大优势是它的特异性、均一性、高效性和无限供应性。在免疫学、医学、生物学等领域的基础研究和临床医学上,包括对疾病(包括癌症)的诊断、预防和治疗等方面,均显示出巨大的生命力。


服务内容:

试验材料

1.客户提供抗原,包括必要的质控数据。
2.抗原数量、保存方式和运输方式需要提前沟通。
3.免疫方式和小鼠的种类和数量需要提前沟通。

步骤

服务内容

周期(周)

制备多抗

1.准备3只健康、6-8周龄Balb/c小鼠,使用其他品系小鼠需要提前沟通。
2.使用水溶性佐剂或者弗氏佐剂,免疫2-3次。佐剂类型和免疫方案需要提前沟通。
3.采集小鼠血清,包被免疫原,采用ELISA方法检测效价。
4.提交效价检测结果给客户,如果血清效价合格,采血,分离抗血清;如果血清效价不合格,项目停止。

6-8周

纯化多抗

1.合并小鼠血清,采用Protein A/G亲和层析纯化小鼠血清多抗IgG。
2. SDS-PAGE电泳鉴定纯化抗体。

1-2周

融合实验

效价合格,客户同意进行融合实验:
1.选取效价最高的小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。
2.有限稀释融合细胞,96孔板克隆化【铺5-10块板】。
3. HAT选择杂交瘤细胞。
4.包被免疫原,进行ELISA检测,检测出1-100个抗原阳性IgG分泌细胞。
5.挑取阳性克隆,微量-80度冻存细胞【冻存细胞可保存1年以上】。
6.每株阳性克隆提供100ul--1ml杂交瘤细胞上清,供客户进行检测。
7.客户根据HIAT或自己的ELISA检测结果,挑选1-10株阳性克隆。
8. HIAT复苏、扩增和冻存客户确定的1-10株阳性克隆,丢弃其余克隆。如果客户需要保存其余克隆,需要提前沟通,另行约定费用和保存方式。

3-4周

 

亚克隆

根据客户的要求,选取1个阳性克隆进行亚克隆:
1. 每个克隆做2次以上96孔板有限稀释培养。
2. ELISA挑选3-5个亚克隆细胞株。
3. 放大至T-25 Flask培养,ELISA再次检测。
4.常规冻存细胞,每个亚克隆冻存3管细胞。

4-8周 

报告与送货

1.免疫前血清(20μl/只)。
2.多抗血清(>1.0ml/只)或纯化的鼠血清多抗IgG。
3.提供实验报告,包括免疫流程、效价测定结果、细胞融合和细胞亚克隆过程ELISA检测结果,和纯化鼠血清抗体的SDS-PAGE电泳结果。
4.与客户协商后确定送货方式,物流费用由客户承担。免费重复送货1次。1次以上另行计费。