技术服务

试验材料

1.客户提供抗原，包括必要的质控数据。
2.抗原数量、保存方式和运输方式需要提前沟通。
3.免疫方式和小鼠的种类和数量需要提前沟通。

步骤

服务内容

周期（周）

制备多抗

1.准备3只健康、6-8周龄Balb/c小鼠，使用其他品系小鼠需要提前沟通。
2.使用水溶性佐剂或者弗氏佐剂，免疫2－3次。佐剂类型和免疫方案需要提前沟通。
3.采集小鼠血清，包被免疫原，采用ELISA方法检测效价。
4.提交效价检测结果给客户，如果血清效价合格，采血，分离抗血清；如果血清效价不合格，项目停止。

6-8周

纯化多抗

1.合并小鼠血清，采用Protein A/G亲和层析纯化小鼠血清多抗IgG。
2. SDS-PAGE电泳鉴定纯化抗体。

1-2周

融合实验

效价合格，客户同意进行融合实验：
1.选取效价最高的小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。
2.有限稀释融合细胞，96孔板克隆化【铺5-10块板】。
3. HAT选择杂交瘤细胞。
4.包被免疫原，进行ELISA检测，检测出1-100个抗原阳性IgG分泌细胞。
5.挑取阳性克隆，微量-80度冻存细胞【冻存细胞可保存1年以上】。
6.每株阳性克隆提供100ul--1ml杂交瘤细胞上清，供客户进行检测。
7.客户根据HIAT或自己的ELISA检测结果，挑选1-10株阳性克隆。
8. HIAT复苏、扩增和冻存客户确定的1-10株阳性克隆，丢弃其余克隆。如果客户需要保存其余克隆，需要提前沟通，另行约定费用和保存方式。

3-4周

亚克隆

根据客户的要求，选取1个阳性克隆进行亚克隆：
1. 每个克隆做2次以上96孔板有限稀释培养。
2. ELISA挑选3-5个亚克隆细胞株。
3. 放大至T-25 Flask培养，ELISA再次检测。
4.常规冻存细胞，每个亚克隆冻存3管细胞。

4-8周 

报告与送货

1.免疫前血清（20μl/只）。
2.多抗血清（>1.0ml/只）或纯化的鼠血清多抗IgG。
3.提供实验报告，包括免疫流程、效价测定结果、细胞融合和细胞亚克隆过程ELISA检测结果，和纯化鼠血清抗体的SDS-PAGE电泳结果。
4.与客户协商后确定送货方式，物流费用由客户承担。免费重复送货1次。1次以上另行计费。