技术服务

技术原理：RACE (rapid-amplification of cDNA ends)，即cDNA末端快速克隆技术。RACE基于PCR技术基础之上，先由RT-PCR从RNA中获取cDNA片段，再通过设计引物与PCR向两端延伸扩增从而获得完整的3'端或5'端序列，是一种从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3’末端的有效方法。相比于其他获得新基因的方法，RACE原理简单、无需建立文库、快速廉价，正受到越来越多科研工作者的重视。

3'末端RACE：
利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo（dT）30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物作为上游引物，用一个含有部分接头序列的通用引物作为下游引物，以cDNA第一链为模板，进行PCR循环，把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来。


5'末端RACE：
利用一条基因特异性反转录引物，在反转录酶的作用下合成cDNA第一链，将RNA-DNA杂合链中的RNA降解纯化后，利用末端转移酶在cDNA链的3’端加入PolyC尾巴，然后利用锚定引物和一条基因特异性引物扩增。

实验步骤：
1. 总RNA的提取：我们将使用TRIzol法来提取实验材料的总RNA，这一步可由您自己完成。
2. cDNA的合成与检测：反转录生成cDNA的第一链，再生成cDNA第二链，电泳检测cDNA的产量。
3. RACE 扩增：我们使用锚定PCR（AnchoredPCR）与巢式PCR（Nested PCR）相结合的方法，用试剂盒分别进行3'末端和5'末端RACE。
4. RACE产物检测测序：将RACE产物TA克隆并进行测序。

客户需要提供：
实验样品：
提取Total RNA的材料：动植物组织，细胞或菌液（保证材料充足），液氮或干冰运输；

或者由您直接提供总RNA： 3’RACE：Total RNA>15μg； 5’RACE：Total RNA>25μg。

序列信息：
大于200bp的已知序列(请注明已知序列的5’端及3’端)：如果已知序列比较短，建议先进行3’RACE再进行5’RACE，以提高实验的成功率；
实验数据和参考文献：这将会帮助我们更好地理解您的实验背景，有利于实验的顺利进行。
 
实验将得到的结果：
实验报告：引物信息实验过程 PCR产物照片；
测序结果：测序彩色波形图、测序方向图、碱基序列图；
实验产物：引物、测序用质粒（限产生克隆测序的情况）。
 
服务说明：
1. 请保证材料或者总RNA新鲜，如果基因的含量较低或者未知序列较长，样品量需相应增加；
2. 我们会根据已知序列进行特异性扩增，如果得不到目的序列或为非目的基因的序列，我们将停止实验并收取实验成本费用；如果得到序列与您提供的序列有个别碱基不符，我们在征求您的意见后决定是否进行RACE实验；
3. 我们将设计跨内含子引物PCR检验基因表达水平，如果经验证，样品中基因表达含量低时，我们将与您沟通后，决定下一步实验使用的方法；

4. 对于原核生物RNA我们仅进行5'RACE。

实验周期及收费标准：

服务项目	基础费用（500bp以内)	超过部分	周期（工作日）
3'RACE技术服务	3800元	2元/bp	15-20工作日
5'RACE技术服务	4800元	5元/1bp	15-20工作日

上述收费标准是针对正常基因，对于基因含量低于正常的样品，我们会使用特殊的方法，具体情况请与技术人员沟通协商。
服务说明：
1、如果您的样品为原核生物，我们无法保证序列为3'端或5'端全长。
2、由于mRNA存在个体和组织差异，PCR产物测序或许会有套峰存在，此种情况之下我们会提供2个克隆的测序结果，由客户最终确认其准确性。