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原核蛋白表达与纯化服务

原核蛋白表达系统以大肠杆菌为宿主细胞,具有细胞增殖快、表达量高、纯化方便、稳定性好、抗污染能力强和成本低等优势,原核蛋白表达系统最为成熟可靠,同时也是目前蛋白表达实验中最常用、最经济实惠的表达系统。

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原核蛋白表达系统以大肠杆菌为宿主细胞,具有细胞增殖快、表达量高、纯化方便、稳定性好、抗污染能力强和成本低等优势,原核蛋白表达系统最为成熟可靠,同时也是目前蛋白表达实验中最常用、最经济实惠的表达系统。


服务特色: 
1、一站式解决方案,从基因合成,载体构建,蛋白表达及纯化一站式服务。 
2、专业的技术团队,具有多年的蛋白表达及纯化服务经验,经验丰富。 

3、完备表达载体库,多种促溶促表达标签的优化组合,确保成功高效表达。


蛋白表达服务表单填写:蛋白质表达纯化服务表单


服务内容:


服务步骤

实验内容

交付结果

步骤1:

目的基因全基因合成

1.从GenBank中寻找目的蛋白的cDNA序列。 

2.根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化。 

3.合成设计好的基因序列,并克隆到标准T载体。

1.含目的基因的冻干质粒,穿刺菌及测序报告(如果客户直接提供构建好的质粒,则免去这部分费用)。

步骤2:

目的基因亚克隆

1.培养并抽提含有目的基因的载体质粒。 

2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。 

3.测序验证表达质粒的准确性。

正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

步骤3:

E. coli 

表达菌株转化及筛选

1.培养并抽提构建好的表达质粒。 

2.将表达质粒转化至高效的E. coli表达菌株中。 

3.至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。

4.SDS-PAGE电泳检测培养后的目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。

重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

步骤4:

目的蛋白表达及纯化

1.摇瓶培养1L重组细菌,对蛋白表达时间,温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化,并诱导表达目的蛋白。 

2.通过亲和层析,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

3.利用蛋白酶去除不需要的纯化标签,再纯化获得所需的目的蛋白。 

4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。 

5.通过Western-blot验证目的蛋白正确性。

1.纯化好的目标蛋白1-5mg及纯化报告。

2.可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白,纯度最高可达95%以上。

3.提供QC报告:SDS-PAGE,Western Blot。

步骤5:

目的蛋白的再加工及详细检测

1.对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。 

2.内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。 

3.通过HPLC,质谱等方法详细检测目的蛋白的质量

加工后的终产品及相关实验和检测报告。


备注:
1.根据客户需要,客户提供基因序列,我们提供基因合成,载体构建,蛋白表达及纯化一站式服务,最终按步骤收取实验费用。
2.蛋白在表达之前需要对核酸序列进行前期分析,但细胞膜蛋白和一些特殊的毒性蛋白不在服务范围之内。
3.因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同,我们最终根据实际情况将给客户提供最少1mg,最多10mg的目标蛋白,所收取的费用是相同的,需要再次纯化获得更多的蛋白,另收费为2000/mg。
4.每次Western blot检测最多7个样品,因为要加入阳性对照,阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测,如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗,如果客户需要使用其他一抗,则需要客户提供,或者我们公司代购,费用单独计算。
5.我们还可以承接酵母蛋白表达,哺乳动物蛋白表达和昆虫细胞蛋白表达等服务。