技术服务

服务步骤

实验内容

交付结果

步骤1：

目的基因全基因合成

1.从GenBank中寻找目的蛋白的cDNA序列。 

2.根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化。 

3.合成设计好的基因序列，并克隆到标准T载体。

1.含目的基因的冻干质粒，穿刺菌及测序报告（如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用）。

步骤2：

目的基因亚克隆

1.培养并抽提含有目的基因的载体质粒。 

2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。 

3.测序验证表达质粒的准确性。

正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

步骤3：

E. coli 

表达菌株转化及筛选

1.培养并抽提构建好的表达质粒。 

2.将表达质粒转化至高效的E. coli表达菌株中。 

3.至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。

4.SDS-PAGE电泳检测培养后的目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。

重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

步骤4：

目的蛋白表达及纯化

1.摇瓶培养1L重组细菌，对蛋白表达时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，并诱导表达目的蛋白。 

2.通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

3.利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目的蛋白。 

4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。 

5.通过Western-blot验证目的蛋白正确性。

1.纯化好的目标蛋白1-5mg及纯化报告。

2.可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白，纯度最高可达95%以上。

3.提供QC报告：SDS-PAGE，Western Blot。

步骤5：

目的蛋白的再加工及详细检测

1.对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。 

2.内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。 

3.通过HPLC，质谱等方法详细检测目的蛋白的质量

加工后的终产品及相关实验和检测报告。