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哺乳动物蛋白表达与纯化服务

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真核哺乳动物细胞凭借蛋白折叠和翻译后修饰的优点,使其蛋白更接近天然蛋白,从而获得与天然蛋白相同的生物活性。由哺乳动物系统表达的重组蛋白通常应用于功能蛋白,抗体生产和临床疫苗等。


我们提供的哺乳动物细胞重组蛋白表达服务,主要包括目标基因生物信息学分析,瞬时转染表达,稳定细胞系构建,以及重组抗体的生产。我们通常采用无血清悬浮细胞培养的方法,对HEK293(人胚肾细胞)和CHO(中国仓鼠卵巢细胞)等真核宿主细胞进行培养。


蛋白表达服务表单填写:蛋白质表达纯化服务表单


服务内容简介

1.高表达质粒构建与优化
将客户的cDNA克隆至哺乳动物瞬时/稳定表达载体上,同时我们可以根据客户的要求对每个载体添加分泌信号肽或纯化标签。在此基础上,我们还可以帮助客户优化流程,生产出高效稳定的细胞系。

2.稳定细胞系构建
稳定基因表达是将目的基因克隆到哺乳动物稳定表达载体上,整个实验操作流程分为转染,筛选、细胞分离和评估(评估克隆在无血清培养条件下的表达量和适应性),目的是使之可以长期稳定生产。

3.瞬时转染表达(TGE)
相较于稳定基因表达,TGE主要用于短期内制备蛋白。我们的瞬时表达使用的是无血清悬浮培养的方法,在完成表达纯化后,交付给客户重组蛋白。(注:转染后的检测包括:PCR检测目的基因,SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白的表达情况)

4.生产工艺优化
我们会对表达过程及表达产物进行及时优化,预测细胞表达量的同时还会对增长率,转种率,细胞群,以及表达条件等进行全面分析。

5.重组蛋白鉴定
通过亲和层析,离子交换层析和凝胶过滤层析等方法纯化蛋白之后,我们有完备的蛋白检测手段:SDS-PAGE或Native-PAGE检测,Western blotting,吸收光谱,N末端序列测定,质谱分析,核磁共振波谱分析。

细胞瞬时转染蛋白表达能够在短期内得到毫克至克级的重组蛋白,广泛地应用于基因产物的快速表达及蛋白质的小规模制备等方面。细胞瞬时转染表达能够快速灵活的制备重组蛋白,细胞在转染后1-4天内即能可收获并进行分析。以CHO(中国仓鼠卵巢细胞)和HEK293(人胚肾细胞)为表达宿主进行悬浮培养,能够获得大量的培养上清液,可生产毫克至克级的重组蛋白。目前,瞬时表达技术已广泛应用于抗体生产,疾病诊断,疫苗开发等多个领域。

服务项目

服务内容

服务周期

交付内容

基因合成

亚克隆

基因合成

 

3~4周

基因构建

测序报告

载体构建

质粒制备

 

瞬时转染

细胞传代培养

1~2周

瞬时转染表达与检测

纯化报告

纯化产物

细胞转染

收获细胞

表达纯化

表达小试

3~4周


哺乳动物CHO稳定细胞系构建服务,与瞬时转染不同,稳定细胞系构建是指外源基因进入受体细胞并整合到细胞的染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因,因此也称为稳定转染。

项目

服务内容

构建周期

最终交付

基因合成&亚克隆

密码子优化&基因合成

4周

表达载体;

载体构建&质粒制备

测序报告;

细胞转染

细胞转染

4周

3株稳转细胞株;

0.5~1mg 90%;

纯度蛋白;

表达检测(WB或ELISA)

稳定细胞系构建

压力筛选

 

2月

稳转细胞株筛选

蛋白生产

细胞冻存