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CTAB法大量植物基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)

CTAB Maxi Plant DNA Extraction Kit(Column)

包装规格：

一.产品介绍：
改进的经典CTAB植物DNA抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

三.产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

四.适用范围：
    适用于快速提取植物基因组DNA.

五.储存条件：
1.裂解液PL、结合液PQ或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在55℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

六.注意事项：
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到9,000xg，可容纳50ml离心管的台式离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3.需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇（体积比24：1混合）、无水乙醇和β-巯基乙醇。
4.结合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。
6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。


七.操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
    第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量的无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
    取所需适量裂解液PL放置在65℃预热，使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。

1.取适量植物组织（新鲜组织1-2克 或干重组织0.3-0.4克）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2.转移细粉到一个50 ml离心管，不要解冻，加10 ml 65℃预热的裂解液PL (确认已加入β-巯基乙醇至2%)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。

3.65℃水浴30-60分钟，在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
可选:如果组织干燥或者产量低，可以适当延长水浴时间。如果RNA残留多，可在水浴前加入100μl RNA酶（20mg/ml）。
注：如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾，条带扭曲，背景很高等不正常电泳情况，可以加1% RNA酶（10mg/ml）37℃或者室温放置半小时即可消化RNA，消化完后不需要特殊处理便可用于PCR或者酶切。
加入10 ml氯仿或者氯仿/异戊醇（体积比24：1混合），颠倒充分混匀几分钟（或者涡旋混匀），9,000xg 以上离心10分钟。
若提取的植物组织富含多糖多酚，可以在第4步前用等体积酚/氯仿（1：1）抽提一遍。

4.小心吸取上清到一个新的50 ml离心管，注意不要吸到界面物质。
如上清比较浑浊，则需要重复步骤4一遍，直到得到透亮上清。

5.较精确估算上清量，加入1.5倍体积结合液PQ （请先检查是否已加入无水乙醇!）后立刻涡旋，充分混匀。此时可能出现沉淀，但不影响实验结果。

6.将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）静置2分钟， 9,000xg离心2分钟，倒掉收集管中的废液（每次最多可加20 ml混合物离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心）。

7.加入10 ml抑制物去除液IR，9,000xg离心2分钟，弃废液。

8.加入10 ml漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），9,000xg离心2分钟，弃掉废液。

9.重复操作步骤9一遍。

10.将吸附柱AC放回空收集管中，最高速（最好大于9000xg，如果离心机转速低，需要相应延长离心时间）离心10-15分钟以干燥膜基质残留乙醇，用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇，室温或者烘箱晾干几分钟。
该步骤目的为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率，降低DNA产量。如果洗脱产量低，则必须加做步骤12。

11.可选步骤: 选择以下两种方法之一干燥柱子：
 1)取下柱子放置于真空容器中，密封真空容器，提供真空15分钟；
 2)将柱子放置于60－65℃真空干燥箱或烘箱中，放置10-15分钟。

12.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加1.5-2ml洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置3-5分钟分钟，9000 xg离心4-5分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心2分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计和需要产量高，可增大洗脱体积，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于1ml，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

13.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。