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大量全血基因组DNA提取试剂盒(溶液型)

Maxi Blood DNA Isolation Kit(Solution)

包装规格：

一. 产品介绍：

本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA，首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA， 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液，操作步骤简单，实验成本低，产量高，纯度好，适合各种下游实验。

二. 产品特点：
1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在60分钟内完成。
4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500µg），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

三. 适用范围：
适用于快速提取各种动物全血基因组DNA。

四. 试剂盒组成、储存、稳定性：

本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。

五. 储存事项：
1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

六. 注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2500 x g， 4000rpm以上，并配备容纳50ml离心管转头的传统台式离心机。
2.建议采用PP材质，可高温高压灭菌，50ml直口圆底离心管，不用拧螺旋盖，方便开盖，在本实验中，直口圆底离心管方便清洗，经过多次漂洗消毒灭菌，可重复使用，降低实验成本。   
3.用户需自备异丙醇和70％乙醇。
4.典型的产量10ml全血可提取出150-500µg 基因组DNA，不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。
5.溶液型全血基因组DNA提取方法，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量（20µl-10ml），需要具体产品操作说明，请联系我们索取不同处理量的操作说明书。
6.本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。
7.为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放小于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。
8.对于每个样品提取血量大或者用量大的客户，可以和我们联系，我们另外专门准备有优惠的大包装试剂。

七. 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
本试剂盒为溶液型，可按照比例扩大或缩小每次处理的全血量（20µl-10ml）

1.吸取25ml 1x红细胞裂解液（需要先稀释到1x）到一个50ml离心管。使用前应该用去离子水将10x红细胞裂解液稀释10倍到1x。

2.将抗凝全血（使用前回复到室温）颠倒混匀后，吸取10ml全血加到上步装有红细胞裂解液的50ml离心管中，颠倒6-8次，并倒置轻弹管壁，确保充分混匀。

3.室温放置10分钟，期间颠倒混匀6-8次，也可放在漩涡震荡仪或摇床上震荡混匀帮助裂解红细胞。

4.2500 x g，4000rpm台式离心机离心2分钟，倒弃红色上清，在吸水纸上倒扣离心管吸净管口残留的血液。

   可选步骤，再加入3-5ml红细胞裂解液上下颠倒几次，静置1-2分钟，2500 x g，4000rpm离心2分钟，之后倒弃红色上清，两次红细胞裂解DNA纯度更好。

5.加入10ml细胞核裂解液用巴氏吸管迅速有力的上下吹打5-10次以裂解白细胞（吹散白细胞团步骤非常重要，不可省略），然后在60-65℃水浴锅或烘箱中恒温放置30-60min左右，具体时间看白细胞裂解状况而定。
  备注：剧烈涡旋震荡和迅速吹打可以帮助细胞核裂解液和白细胞接触并裂解，由于基因组DNA立刻释放出来，混合物会马上变得十分粘稠，就应停止吹打，以免剪切断基因组DNA。

6.可选步骤，一般不需要：在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至终浓度30μg/ml，颠倒25次混匀，37℃温育15分钟去除残留RNA，然后冷却回室温。

7.将所有离心管从水浴锅或烘箱中从取出，加入3.33ml蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒，混匀后可能见到一些小的蛋白团块，也可以用巴氏吸管迅速有力的上下吹打5-10次，这样混匀效果更好。

8.2500 x g，4000rpm离心5-10分钟。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

9.小心吸取或者倒出上清（约10-12ml）到一个新的50ml离心管中。吸取上清时，注意不要吸到管底和漂浮在液体表面的蛋白沉淀，如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。

10.加入等体积的室温异丙醇10-12ml，轻柔颠倒30次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色DNA沉淀。
可选方案：DNA转移结束后将50ml离心管上标记的编号用异丙醇擦净，倒掉离心管中的溶液，然后将管子泡在放有消毒片或洗衣粉的塑料桶里浸泡半天后，将离心管用自来水冲洗刷净，再用84消毒液浸泡一天，之后多次用清水漂洗，最后高压灭菌重复使用。 

11.用黄枪头吸取DNA沉淀转移到洁净的1.5ml EP管中，并吸净上清液。加入300-500μl 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀，12,000rpm离心1分钟， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，也可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶，也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。

12.加入100-500μl DNA溶解液重新溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。

13.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。