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HyPure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒

适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA。不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤,适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA。不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度。

产品编号:2518

产品规格:50T/100T/200T

产品价格:600/960/1860

包装:

储存条件:4℃

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HyPure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型)


包装规格:

2518A HyPure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型) 50次 600元
2518B HyPure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型) 100次 960元
2518C HyPure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型) 200次 1860元


一.产品介绍:
    该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。


    新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

二.产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。

三.适用范围:
    适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA。

四.储存条件:
1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

五.注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3.缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。
5.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱 (10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

七.操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
    提示:
    第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
    第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇!
1.取适量植物组织(新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg,可适当多取一些样品弥补粘在研钵上的损失)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
研磨前,可准备一个1.5ml 离心管,加入400μl缓冲液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)室温备用。 


2.转移细粉(新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg)到前面准备的1.5ml离心管(已加入400μl缓冲液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)旋涡振荡,充分混匀帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织,因为后面有一个离心去除的步骤。


3.65℃水浴10分钟,在水浴过程中颠倒离心管2-3次,混合样品。


4.加入130 μl 缓冲液AP2,充分混匀,冰上放置5分钟, 14,000 rpm 离心5-10 分钟,小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管,注意不要吸到界面物质。


5.计算上清量,加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!),立即吹打混匀。
加入AP3/E可能会出现絮状沉淀,但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打混匀。


6.将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液(先加650μl离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。


7.加入600μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。


8.加入600μl漂洗液WB,12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。


9.将吸附柱AC放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。


10.取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液可事先在 65-70℃水浴中预热), 室温放置3-5分钟,12,000 rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,12,000 rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。


11.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。



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