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尿液基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)

Urine DNA Extraction Kit(Column)

包装规格：

一.产品介绍：
    尿液中DNA来自于尿道中脱落的细胞，用尿液DNA进行分子生物学基础研究和临床诊断有很多特殊的优点：1）尿液收集物是非介入、无创伤性的。2）从尿液中提取DNA要比从血液中提取DNA更加简单。本产品就是专门用于从尿液中提取基因组DNA的产品，提取的DNA可直接用于PCR反应。本产品具有下列特点： 

二.产品特点：
1.操作简单，整个过程室温操作约20分钟，适合大规模样品处理。 
2.DNA产率女性一般为50-200 ng/mL尿液，男性一般为3-50 ng/mL尿液。 
3.所提取的DNA纯净，可直接用于PCR、DNA甲基化鉴定、癌症检测等。 
4.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。 
5.性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。

三.储存条件：
1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

四.注意事项：
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.需要自备异丙醇。
3.开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

五.操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
   提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1.取5-50 ml尿液，放入适当大小离心管，3,000 rpm离心收集细胞沉淀。

2.小心弃上清，加入200μl缓冲液UB重悬细胞。

3.加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入200μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。溶液应变清亮。

     
4.冷却后加入100μl 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。

5.将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

6.加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm 离心30秒，弃废液。 

7.加入500μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。

8.加入500μl漂洗液WB，12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。

9.将吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加30μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置3-5分钟，12,000 rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000 rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但最小体积不应少于15μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

11.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。