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总蛋白提取试剂盒

产品介绍：
本试剂盒提供全套试剂，适用于从各种哺乳动物细胞（原代或传代细胞、贴壁或悬浮细胞等）和各种实体软组织（如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织）提取总蛋白。提取过程简单方便，无须超速离心机。本试剂盒含有的独特变性剂能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等蛋白研究。

产品配制和储存：
为方便运输，提供PMSF为晶体状，收到后，可短暂离心后，加入1ml无水乙醇或者异丙醇溶解成100mM PMSF储液，2-8℃保存至少半年，－20℃长期保存，可分装成小份贮存于-20℃。TPEB可2-8℃保存半年，－20℃长期保存。如TPEB有沉淀析出，可37℃-60℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用。

使用方法：
A. 细胞总蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前数分钟内加入5 μl PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500 g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入500 μl冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5. 在4℃，16,000 g条件下离心15分钟。
6. 快速将上清转移至另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

B. 组织总蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前数分钟内加入5 μl PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 取100 mg组织样本剪碎，加入裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中，在4℃，16000 g条件下离心5分钟。
4. 快速将上清转移至另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
上述蛋白提取物可立即用于后续实验，或分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项：1. 实验过程中的所有试剂可冰上预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
2. 整个过程须保持样品处于低温状态。
3. 蛋白浓度用BCA法测定 。