RNA清洁纯化浓缩试剂盒(RNAclean)
RNA Cleanup and Concentration Kit(RNAclean)
一.试剂盒组成、储存、稳定性：
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Contents
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Storage
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RM2131-50
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50T
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结合液Buffer RC
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室温
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20 mL
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漂洗液Buffer RW
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室温
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10 mL
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第一次使用前按说明加指定量乙醇
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RNase-free H2O
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室温
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10 mL
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RNA吸附柱Spin RA
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室温
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50
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收集管(2mL)
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室温
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50
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二.保存条件：
1.本试剂盒在室温（15℃ ~ 25℃）干燥条件下可保存12个月。
2.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
三.自备物品：
无水乙醇、台式高速离心机、水浴锅。
四.产品简介：
本试剂盒使用离心吸附柱硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。在高盐条件下RNA 与硅胶吸附膜高效、专一地结合，同时最大限度除去蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等，在低盐条件下，RNA 被洗脱。可处理的RNA 样品量可高达50 μg。本试剂盒用于从酶反应液（如DNase 处理、蛋白酶处理、RNA 标记等）中纯化回收RNA，也可用于从其它方式提取获得的RNA 的纯化。 纯化的总RNA 没有蛋白的污染，所得的RNA 可用于Northern blot、Dot blot、mRNA 提取、cDNA合成、引物延伸、差异显示等。
五.注意事项：
本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。
六.操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：第一次使用前请先在漂洗液Buffer RW中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
以下所有步骤均可以在室温进行，但是应该迅速操作，减少RNA降解机会。
1.冰上RNA样品加入 RNase-free water 补足至100 μL，加入350 μL溶液RC，混匀。
2.加入250 μL无水乙醇，混匀，无需离心。
3.上一步所得溶液和可能有的沉淀一起转入吸附柱Spin RA中（吸附柱套在收集管内），4℃ 12,000 rpm 离心45秒，弃掉收集管中的废液，将吸附柱重新套回收集管。
如需去除DNA微量残留，可在本步骤后进行DNA酶柱子上直接消化，详见附录。
4.加 0.5 mL漂洗液Buffer RW（请先检查是否已加入乙醇），4℃ 12,000 rpm离心45秒，弃废液。
5.加 0.5 mL 漂洗液Buffer RW，4℃ 12,000 rpm 离心45秒，弃废液。
6.4℃ 13,000 rpm 离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7.取出吸附柱Spin RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80 μL RNase free water（事先在 65-70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置2分钟， 12,000 rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟,或者另外再加30 μL RNase free water，离心一分钟，合并两次洗脱液。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μL，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。
附录：DNase I 柱上消化
本试剂盒还可以进行离心柱上DNA酶消化以去除RNA样品中微量DNA污染, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,可以购买各种商品化的RNase free DNase直接在离心吸附柱子RA上面消化DNA，然后纯净RNA可以洗脱下来直接使用。客户可根据需要向本公司购买去蛋白液RW1。
以R2127 DNase I 柱上消化试剂盒举例：
DNase I 工作液的配制：
取45 μL DNase I buffer和5 μL RNase free DNase I离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。
注：如果残留DNA过多导致消化不完全，可按比例加大使用酶量来提高消化效果（如90 μL DNase I buffer和10 μL RNase free DNase I）
操作步骤：
1.前面按照正常步骤操作，在步骤3完成后按照以下步骤操作。
2.向吸附柱Spin RA中加入350 μL去蛋白液RW1，12,000 rpm离心30秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
3.向吸附柱Spin RA中央加入50 μL的DNase I 工作液，室温（20-30℃）放置15 分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。
4.向吸附柱Spin RA中加入350 μL去蛋白液RW1，12,000 rpm离心30-60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
接漂洗液Buffer RW步骤等后续步骤。如果是其它公司试剂盒，则接最后的一个漂洗液漂洗等后续步骤。
