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SpinFast™血清血浆microRNA提取试剂盒

适用于从动物及人体血浆和血清中纯化包括miRNA的无细胞总RNA。无需有毒的苯酚/氯仿抽提,乙醇沉淀等步骤,操作步骤少,RNA提取速度快,无杂质残留,配合DNase I柱上消化DNA试剂盒(货号2127)可有效去除DNA微量残留,RNA纯度更高!适合于对纯度要求很高的下游实验。

产品编号:2144

产品规格:50次/200次

产品价格:2185/8300

包装:

储存条件:4℃

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SpinFast™血清血浆microRNA提取试剂盒(离心柱型)

SpinFast™ Serum/Plasma microRNA Kit


产品包装:

2144A SpinFast™血清血浆microRNA提取试剂盒(离心柱型) 50次 2185元
2144B SpinFast™血清血浆microRNA提取试剂盒(离心柱型) 200次 8300元
2144DM SpinFast™微量血清血浆microRNA提取试剂盒(离心柱型) 50次 2385元


一.产品介绍:
近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15¬-30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA,对于血清血浆样本更是由于其自身特点更难提取。本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜, 再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除, 最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

二.产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.也不需要异丙醇或者乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。
3.特殊的裂解液配方,可以处理更多的血清/血浆样品。
4.多次柱漂洗确保高纯度,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。

三.适用范围:
       适用于从动物及人体血浆和血清中纯化包括miRNA的无细胞总RNA。

四.储存条件:
1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接不吸晶体,吸上清使用就可以。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

五.注意事项:
1.第一次使用前请先在Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2.除说明外,所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3.需要自备乙醇,氯*。
4.Lysis buffer 和Wash Solution 1含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.RNA 纯度及浓度检测:
       一般情况下通过测量OD260值可以知道RNA产量,测量OD260/OD280 比值可以是衡量蛋白质污染程度的指标之一,但是由于血清/血浆的RNA含量特别低,已经低于分光光度计测量的下限,无法测量准确,因此一般无法通过测量OD值或者比值的方法来判断纯度或者浓度,只能通过下游做荧光定量RT-PCR来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的RNA主要是小于100 nt的小RNA,因此传统的电泳检测RNA完整性并不适用于血清/血浆RNA。

六.操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇!
1.每250μl样品(血清,血浆)加入750μl Lysis buffer,涡旋振荡或者用加样枪吹打液体样品几次混匀帮助裂解。 
对于含有高污染物样品如高蛋白高血脂样品,可以适当减少处理量,不足的体积,可以用去RNase-free H2O补足。Lysis buffer和液体样品的终体积比总是3:1。例如200μl样品+50μl RNase-free H2O+750μl Lysis buffer。


2.将样品剧烈震荡混匀,在15 -30°C条件下孵育5分钟。


3.每750μl Lysis buffer加200μl 氯*,剧烈振荡15秒并室温下放置2分钟。


4.于4℃12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加Lysis buffer体积的70%。


5.小心取上清(精确计算体积)转入到新的离心管,加入1.5倍体积的无水乙醇(必须是室温的),涡旋混匀。此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心,立刻接下步。


6.将混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心30-60秒,弃掉废液。


7.加700μl Wash Solution 1(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。


8.加入500μl Wash Solution 2/3(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl Wash Solution 2/3,重复一遍。


9.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。


10.取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-40μl RNase free water(事先在 100℃水浴中预热效果更好), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。洗脱液加回到吸附柱重复洗脱一遍可以提高产量和浓度(如果需要RNA浓度高)。如果需要提高浓度,洗脱体积最小可以低至15μl,但是使用小体积洗脱会降低一些产量。


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qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。