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超纯总RNA提取试剂盒(离心柱型)

UltraPure Total RNA Extraction Kit(Column)

包装规格：

本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍：
超纯总RNA提取试剂盒，适用于各种动植物组织及细胞的总RNA提取。裂解液RL可以高效裂解组织细胞，灭活RNA酶；结合多次柱漂洗的方式，可以提取无蛋白、基因组、细胞代谢物等杂质污染的高纯度、高质量的总RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
适用广：适用于动物组织，植物组织，各种微生物和培养细胞等各类样品材料的RNA提取。
易操作：操作简便，提取过程仅需 30 分钟左右。 
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 
样品处理：
1.动物组织：取新鲜或－80°C冻存动物组织尽量剪碎，每30 ~ 100mg组织加入1ml 裂解液RL，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入1ml裂解液RL混匀。注意：样品体积一般不超过裂解液RL体积的10%。
2.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在裂解液RL中迅速研磨，每50 ~ 100mg组织加入1ml 裂解液RL混匀。注意：样品体积一般不超过裂解液RL体积的10%。
3.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液RL裂解细胞，按培养板面积每10cm²加1ml裂解液 RL，用移液器反复吹打，直到看不到明显的细胞团为止。裂解液加入量不足会有DNA污染。
4.悬浮细胞：离心收集细胞。每5~10×10⁶动物、植物和酵母细胞或每1×10⁷细菌细胞加1ml裂解液混匀。用移液器 反复吹打，直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤，避免mRNA降解。
5.若提取细菌RNA，推荐SpinPure™细菌RNA快速提取试剂盒(离心柱型)（目录号：2120）；若提取血液RNA，推荐TRI LS Reagent液体样品总RNA抽提试剂(TRIzol LS Reagent)（目录号：2107）。

提取步骤：
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
2.可选步骤：在4°C 12,000rpm 离心10分钟，取上清转入一个新的RNase free的离心管中。（当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要额外的分离步骤。）
3.每1ml 裂解液RL加200μl氯仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡15秒并将其在室温下静置3分钟。
4.4°C 12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上清水相层，RNA存在于上清水相层中。
5.将上清水相转入新的离心管中，加入0.5倍上清水相体积的无水乙醇，立即吹打混匀。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）
6.将混合溶液（每次小于700μl，）转入套有吸附柱AC的离心管中，12,000rpm 离心45秒，弃掉废液。
7.加500μl去蛋白液RE，12,000 rpm离心45秒，弃掉废液。
8.加500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心45秒，弃掉废液。
9.重复步骤8一次。
10.将吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的RNase-free离心管中，在吸附膜的中间部位加50 ~ 80μl RNase-free H2O，室温静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟。洗脱后的RNA可立即使用或保存在－80°C。

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