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超纯总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)

改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱,适用于各种动植物组织/细胞总RNA的快速抽提。

产品编号:2102

产品规格:20次/50次

产品价格:468/780

包装:

储存条件:4℃

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超纯总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)


一. 产品介绍:

改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

二. 产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 
2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。 
3.独有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。 
4.多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。 
5.有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。


三. 适用范围:
适用于各种动植物组织/细胞总RNA的快速抽提。

四. 储存条件:
1.因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。裂解液RL可以常温运输,收到后4℃避光可长期保存,常温保存3个月不影响使用质量。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

五. 注意事项:
1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2.本试剂盒抑制RNA酶效果极佳,所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。 
3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,使用前需要自备氯仿。
5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6.检测OD260/OD280吸光度比值时,如需稀释RNA样品应该用TE(PH 8),如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。
7.加入裂解液RL匀浆后,加氯仿前,样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。
8.若提取细菌RNA,推荐 细菌RNA快速提取试剂盒(离心柱型)(目录号:2119和2120)。

六. 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)

提示:第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇! 


1.匀浆处理
a.组织 
将组织在液氮中磨碎,每50~100mg组织加1ml 的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。

b.单层生长的细胞 
直接往直径3.5 cm 的培养板中加入1ml的RL溶解细胞,并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量(每10cm2加1ml)。一般情况下,普通大小的细胞培养瓶,加入1ml 的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶,轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。 

c.悬浮生长的细胞 
通过离心来沉淀细胞,小心弃上清。每5~10×106 的动物细胞,植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。

2.将匀浆样品剧烈震荡混匀,在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。

3.可选步骤:4°C 的条件下12,000rpm 离心10分钟,小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8°C的条件下以12,000rpm离心10分钟,移除匀浆中不溶解的物质,余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA,而上层的超浮游物含有RNA。

4.每1ml RL加0.2ml 氯仿。盖紧样品管盖,剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。

5.于4℃12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%,把水相小心转移到新管中(不要触碰中间层),记录水相体积。

6.加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内,若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱RA中,请分两次转入吸附柱RA中。) ,12,000rpm 离心45秒,弃废液,将吸附柱重新套回收集管。

7.加500μl去蛋白液RE,12,000 rpm离心45秒,弃废液。

8.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心45秒,弃废液。

9.重复步骤8一次。

10.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm 离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11.取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water,室温放置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water,离心1分钟,合并两次洗脱液。

洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积最好不少于30μl,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。

具体产品折扣价请邮件或电话咨询!


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我们还承接各种组织样品RNA提取,反转录,实时荧光定量PCR检测服务! 链接:点击


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反转录免费,内参基因免费,引物设计合成筛选免费;

根据具体样品数量,组织RNA提取难度,酌情收取少量RNA提取费用;


技术优势:

1. 各种组织样品RNA提取试剂盒的研发生产和提取经验;

2. 专业的引物设计技能,保证qPCR引物的特异性;

3. 熟练的qPCR操作技能,保证完美的qPCR结果;

qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。

RNA提取产品选择指南:

样品类别 编号 产品用途及优势
动物组织细胞 2101B RNASure Reagent:质量和效果同进口Trizol,价格最实惠
2102B 超纯总RNA快速提取试剂盒:质量同T公司DP419,Trizol+离心柱,速度更快,纯度更高,操作更简单,价格实惠
2103B 组织/细胞RNA快速提取试剂盒:质量同Q公司74104,无需酚/氯仿抽提,速度最快,有少量DNA残留,需加DNA酶消化
2104B EASY组织/细胞RNA快速提取试剂盒:同Q公司74134,无需酚/氯仿抽提,不用DNA酶消化,无DNA残留,15min提取的RNA可直接做qPCR 
血液样品 2107B TRI LS Reagent:液体样品RNA提取试剂,不用离心柱纯度差一点,对操作技术要求高,可用于新鲜血样的保存运输,之后再用2108B全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒提取RNA
2108B 全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒:用于-80℃冷冻抗凝全血总RNA提取,也可用于新鲜血样或2107B TRI LS Reagent保存运输的样品RNA提取
2109B 超纯全血总RNA快速提取试剂盒:新鲜全血总RNA提取重点推荐产品,RNA纯度高,操作简单
2110B EASY全血RNA快速提取试剂盒:同Q公司52304,无需酚/氯仿抽提,有少量DNA残留,需加DNA酶消化
2111A RNAstore Blood RNA Kit:仅用于保存在RNAfixer中常温或4℃运输后的抗凝全血RNA提取,提取产量高,纯度好
2112A PAXgene Blood RNA Kit:同BD 762165,集静脉采血、稳定核酸、提取纯化RNA一体,可常温运输保存
普通植物组织 2101B RNASure Reagent:质量和效果同进口Trizol,价格最实惠
2113B 通用植物总RNA快速提取试剂盒:可用于普通植物组织细胞RNA提取,Trizol+离心柱型,速度更快,纯度更高,操作更简单
多酚多糖植物组织 2114B 植物RNA快速提取试剂盒:质量同Q公司74904,无需酚/氯仿抽提,速度最快,操作简单,不带DNA酶柱上消化,适合做普通的反转录和克隆
2115B EASY植物RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,操作简单,带DNA酶柱上消化步骤来清除残留DNA,提取的RNA可以做qPCR
2116A EASY通用植物RNA提取试剂盒:质量同T公司DP432,无需酚/氯仿抽提,速度最快,操作最简单,带DNA酶柱上消化,提取的RNA可以做qPCR
2117A EASY多糖多酚/复杂植物RNA提取试剂盒:可以解决复杂多糖多酚,色素淀粉含量大,其他公司产品提取失败或产量低的复杂植物样品
纤维丰富组织 2118B 纤维类组织RNA快速提取试剂盒:效果同Q公司74704,适合心脏、骨骼肌、血管、气管、食管、眼球、皮肤、耳朵等纤维含量丰富的组织总RNA提取,使用Dnase I去除残留的基因组DNA
细菌样品 2119B 细菌RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单
2120B EASY细菌RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单,无DNA残留
真菌样品 2121B EASY真菌RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,操作简单,带DNA酶柱上消化步骤来清除残留DNA,提取的RNA可以做qPCR
酵母样品 2122B 酵母RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单
病毒样品 2123A 病毒RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,RNA 纯度高,质量可靠,可用于PCR/RT-PCR等下游实验
2124A 病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,RNA 纯度高,质量可靠,可用于各种下游实验
RNA储存液 2126B RNAfixer 无液氮RNA样品储存液:同RNAlater,稳定和保护未冷冻样本中的RNA完整性
DNA消化试剂 2127A Dnase I 柱上消化试剂盒:快速消化硅胶膜上残留的DNA,无需实验后单独清除残留的DNA
2128A Dnase I 快速DNA消化试剂盒:对RNA中残留的DNA进行消化后用于反转录荧光定量PCR
RNA保护试剂 2129A RNA长期保存液:RNA 样品运输和中长期保存的最佳选择,可4℃过夜保存或-20℃保存至少1年
2130A Rnase抑制剂:用来保护RNA免受Rnase降解,用于RT等下游实验
RNA纯化试剂 2131B RNA清洁纯化试剂盒:纯化的总RNA 没有蛋白的污染,所得的RNA 可用于多种下游实验。