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组织/细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒(离心柱型)

Tissue/Cell RNA/DNA/Protein Extraction Kit(Column)

包装规格：

本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍：
组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒，可快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取DNA、RNA和Protein。无需苯酚、氯仿等有机试剂。用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶，通过基因组DNA吸附柱时，DNA会吸附在吸附柱内，而RNA和Protein会滤过，通过后续的多次柱漂洗的方式。可在60分钟左右，同时提取纯度高，没有杂质污染，互不干扰的DNA、RNA和Protein。

得到的RNA产物可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。基因组DNA也可用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。Protein可用于SDS-PAGE电泳或者western blot 等试验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性：适用于动物组织和培养细胞，可同时提取互不干扰的总RNA和基因组DNA。
易操作：操作简便，提取过程仅需 60分钟左右。 
安全性：无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA/DNA/Protein的完整性，回收RNA /DNA/Protein效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 
洗脱缓冲液EB在65°C~70°C水浴锅中预热，效果更佳。

样品处理：
1.动物组织：取新鲜或－80°C冻存动物组织尽量剪碎，加入350μl（< 20mg组织）或600μl （20 ~ 30mg组织）的裂解液RLT，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨成细粉后，取研磨组织细粉(20mg/30mg)转入装有350μl/600μl组织裂解液RLT的1.5ml离心管中，剧烈振荡混匀或者200μl吸头吹打混匀。
2.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液RLT裂解细胞，按培养板面积每10cm2加1ml裂解液RLT，用取样器吹打混匀。用移液器反复吹打， 直到看不到明显的细胞团为止。裂解液加入量不足会有DNA污染。
3.悬浮细胞：离心收集细胞。加入350μl裂解液RLT（<5×106细胞）或者600μl裂解液RLT（5×106 ~ 1×107细胞）。 用移液器反复吹打，直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤，避免mRNA降解。

提取步骤：
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟，13,000rpm离心3分钟，会有杂质沉淀。
2.将上清液转入套有基因组DNA吸附柱DA的离心管中。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）
3.13,000 rpm离心60秒，保留滤过液（RNA和Protein在过滤液中）、吸附柱DA（DNA在吸附柱中）。
（此时将分开实验，建议先提取RNA，吸附柱DA短时间可存放4°C度备用。Protein提取从RNA提取步骤5中分离。）

提取RNA步骤：
4.估计滤过液体积，加入等体积的70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇），立即吹打混匀。
5.将混合溶液（每次小于700μl）滴入套有吸附柱RA的离心管中，13,000 rpm离心30秒。（保留滤过液以备提取Protein）
6.将吸附柱RA套入新的离心管中，加700μl 去蛋白液RW1，室温静置1分钟，12，000rpm 离心30秒，弃掉废液。
7.加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
8.重复步骤7一次。
9.将吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应，弃掉废管。
10.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的RNase - free离心管中，在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室温静置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。洗脱后的RNA可立即使用或保存在－80°C,防止降解。

提取DNA步骤：
11.在步骤3的吸附柱DA上加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
12.加入700μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
13.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
14.将DNA吸附柱DA放入收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
15.取出DA吸附柱（避免吸附柱DA的底部碰到收集管里面的废液），放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB， 室温静置3 ~ 5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱 中，室温静置2分钟，12,000rpm离心1分钟。洗脱后的DNA可立即使用或保存在－20°C，防止降解。

提取Protein步骤：
16.将步骤5的滤过液中加入滤过液等体积的缓冲液APP，涡旋振荡混匀，室温静置15分钟沉淀Protein。
17.13,000rpm离心5~10分钟，小心弃上清。加入500μl 70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇），颠倒后离心1分钟，留下蛋白沉淀，尽量将上清液体用移液器吸干净。
18.室温晾干沉淀5~10分钟，让乙醇挥发干净，以免下影响游试验。
19.将蛋白沉淀溶解于30~150μl 1×蛋白上样缓冲液或其它下游试验要求的缓冲液。
20.95°C放置5分钟溶解和变性蛋白，回复到室温，最高速离心1分钟。