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TRIzolplus™总RNA提取试剂(Trizol)

TRIzolplus™ Total RNA Extraction Reagent

包装规格：

本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍：
TRIzolplus Reagent总RNA提取试剂，是广谱型总RNA提取试剂。 本试剂适用于动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中总RNA的提取。TRIzolplus中充分裂解样品的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后，会分成三层，RNA分布在上层上清水相中。收集上清水相后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。
可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
适用广：适用于动物组织，植物组织，各种微生物和培养细胞等各类样品材料的RNA提取。
易操作：操作简便，提取过程仅需 30 分钟左右。 
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 
样品处理：
1.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzolplus中迅速研磨，每50 ~ 100mg组织加入1ml TRIzolplus，混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIzolplus体积的10%。
2.动物组织：取新鲜或－80°C冻存动物组织尽量剪碎，每30 ~ 100mg组织加入1ml TRIzolplus，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨成粉后，转入新的离心管中加入1ml TRIzolplus混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIzolplus体积的10%。
3.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，按培养板面积每10cm²加入1ml TRIzolplus，用移液器反复吹打，直到看不到明显的细胞团为止。TRIzolplus加入量不足会有DNA污染。
4.悬浮细胞：离心收集细胞。每5 ~ 10×10⁶动物、植物和酵母细胞或每1×10⁷细菌细胞加入1ml TRIzolplus混匀。用移液器反复吹打，直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤，避免mRNA降解。
5.若提取细菌RNA，SpinPure™细菌RNA快速提取试剂盒(离心柱型)（目录号：2120）；若提取血液或液体RNA，推荐TRI LS Reagent液体样品总RNA抽提试剂(TRIzol LS Reagent)（目录号：2107）。

提取步骤：
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
2.可选步骤： 4°C 12,000rpm 离心10分钟，取上清转入一个新的RNase free的离心管中。（当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要额外的分离步骤。）
3.每1ml TRIzolplus加200μl氯仿。剧烈振荡15秒并将其在室温下静置3分钟。
4.在4°C 12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机层，中间蛋白层和上清水相层 ，RNA存在于上清水相层中。
5.将上清水相转移到新的离心管中，加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温静置10分钟。（不要吸取沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）
6.4°C 12,000 rpm 离心10分钟，弃上清，此时在管底形成胶装沉淀。
7.每使用1ml TRIzolplus用1ml 75%乙醇对沉淀进行震动涡旋洗涤。
8.4°C 12,000 rpm离心3分钟，弃上清（不要吸取RNA沉淀）。剩余的少量液体可短暂离心，然后用移液器 吸出。
9.室温静置2 ~ 3分钟。加入30 ~ 100μl Rnase-free H2O，充分溶解RNA。沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。洗脱后的RNA可立即使用或保存在－80°C。

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