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组织/细胞RNA快速提取试剂盒 (离心柱型)

独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品编号:2103

产品规格:20次/50次

产品价格:540/1080

包装:

储存条件:4℃

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组织/细胞RNA快速提取试剂盒(离心柱型)


一. 产品介绍:

独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。


二. 产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 
2.不需要使用有毒的苯酚,,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 
3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。 
4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。


三. 适用范围:
适用于快速提取各种细胞组织总RNA。

四. 储存条件:
1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

五. 注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm 的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。


2.需要自备乙醇,一次性注射器,研钵。


3.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。


4.预防RNase 污染,应注意以下几方面:
1)经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2)使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3)RNA 在裂解液RLT 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4)配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)


5.关于DNA 的微量残留:一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,本公司的EASYspin系列RNA提取产品,由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜,在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留(一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1)选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
4)在步骤去蛋白液RW1漂洗前,直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。请联系我们索取具体操作说明书。


6.RNA 纯度及浓度检测:
完整性: RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb,分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在2.1-2.2 之间(100%纯的RNA比值一般是2.2左右,很多公司无法达到这个标准,所以1.9-2.0就凑合用了,但是我们的产品标准一般可以达到2.1-2.2)。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间,但这并不表示RNA 不纯。

浓度:取一定量的 RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260/OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

六. 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!


1.组织培养细胞
a.收集<107悬浮细胞到一个1.5ml离心管,对于贴壁细胞,孔板培养可以直接裂解,细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

b.13000rpm 离心10秒(或者300g离心5分钟),使细胞沉淀下来。完全吸弃上清,留下细胞团,注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。

c.轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬,加入350μl(<5x106细胞)或者600μl(5x106-1x107细胞)裂解液RLT,吹打混匀后用手剧烈振荡20秒,充分裂解。

d.用带钝针头的一次性 1 ml (配0.9mm针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

e.接操作步骤项下3。

2.动物组织(例如鼠肝脑)
a.电动匀浆:新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,加入350μl(<20mg组织)或者600μl(20-30mg组织)的裂解液RLT后电动彻底匀浆20-40秒。

b.液氮研磨+匀浆:在液氮中研磨组织成细粉后,取适量组织细粉(20mg/30mg)转入装有350μl/600μl组织裂解液RLT的1.5ml离心管中, 用手剧烈振荡20秒,充分裂解。用带钝针头的一次性 1 ml(配0.9mm针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

c.将匀浆后裂解物13,000rpm离心3分钟,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物, 将裂解物上清小心转到一个新离心管。

d.接操作步骤项下3。

3.较精确估计裂解物(上清)体积,加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

4.立刻将混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心60秒,弃掉废液。

5.加700μl 去蛋白液RW1,室温放置30秒,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。如果DNA残留明显,可在加入RW1后室温放置5分钟再离心。

6.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。

7.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

8.取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。

9.如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤8, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。


具体产品折扣价请邮件或电话咨询!


实时荧光定量PCR技术服务:

我们还承接各种组织样品RNA提取,反转录,实时荧光定量PCR检测服务! 链接:点击


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反转录免费,内参基因免费,引物设计合成筛选免费;

根据具体样品数量,组织RNA提取难度,酌情收取少量RNA提取费用;


技术优势:

1. 各种组织样品RNA提取试剂盒的研发生产和提取经验;

2. 专业的引物设计技能,保证qPCR引物的特异性;

3. 熟练的qPCR操作技能,保证完美的qPCR结果;

qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。

RNA提取产品选择指南:

样品类别 编号 产品用途及优势
动物组织细胞 2101B RNASure Reagent:质量和效果同进口Trizol,价格最实惠
2102B 超纯总RNA快速提取试剂盒:质量同T公司DP419,Trizol+离心柱,速度更快,纯度更高,操作更简单,价格实惠
2103B 组织/细胞RNA快速提取试剂盒:质量同Q公司74104,无需酚/氯仿抽提,速度最快,有少量DNA残留,需加DNA酶消化
2104B EASY组织/细胞RNA快速提取试剂盒:同Q公司74134,无需酚/氯仿抽提,不用DNA酶消化,无DNA残留,15min提取的RNA可直接做qPCR 
血液样品 2107B TRI LS Reagent:液体样品RNA提取试剂,不用离心柱纯度差一点,对操作技术要求高,可用于新鲜血样的保存运输,之后再用2108B全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒提取RNA
2108B 全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒:用于-80℃冷冻抗凝全血总RNA提取,也可用于新鲜血样或2107B TRI LS Reagent保存运输的样品RNA提取
2109B 超纯全血总RNA快速提取试剂盒:新鲜全血总RNA提取重点推荐产品,RNA纯度高,操作简单
2110B EASY全血RNA快速提取试剂盒:同Q公司52304,无需酚/氯仿抽提,有少量DNA残留,需加DNA酶消化
2111A RNAstore Blood RNA Kit:仅用于保存在RNAfixer中常温或4℃运输后的抗凝全血RNA提取,提取产量高,纯度好
2112A PAXgene Blood RNA Kit:同BD 762165,集静脉采血、稳定核酸、提取纯化RNA一体,可常温运输保存
普通植物组织 2101B RNASure Reagent:质量和效果同进口Trizol,价格最实惠
2113B 通用植物总RNA快速提取试剂盒:可用于普通植物组织细胞RNA提取,Trizol+离心柱型,速度更快,纯度更高,操作更简单
多酚多糖植物组织 2114B 植物RNA快速提取试剂盒:质量同Q公司74904,无需酚/氯仿抽提,速度最快,操作简单,不带DNA酶柱上消化,适合做普通的反转录和克隆
2115B EASY植物RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,操作简单,带DNA酶柱上消化步骤来清除残留DNA,提取的RNA可以做qPCR
2116A EASY通用植物RNA提取试剂盒:质量同T公司DP432,无需酚/氯仿抽提,速度最快,操作最简单,带DNA酶柱上消化,提取的RNA可以做qPCR
2117A EASY多糖多酚/复杂植物RNA提取试剂盒:可以解决复杂多糖多酚,色素淀粉含量大,其他公司产品提取失败或产量低的复杂植物样品
纤维丰富组织 2118B 纤维类组织RNA快速提取试剂盒:效果同Q公司74704,适合心脏、骨骼肌、血管、气管、食管、眼球、皮肤、耳朵等纤维含量丰富的组织总RNA提取,使用Dnase I去除残留的基因组DNA
细菌样品 2119B 细菌RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单
2120B EASY细菌RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单,无DNA残留
真菌样品 2121B EASY真菌RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,操作简单,带DNA酶柱上消化步骤来清除残留DNA,提取的RNA可以做qPCR
酵母样品 2122B 酵母RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单
病毒样品 2123A 病毒RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,RNA 纯度高,质量可靠,可用于PCR/RT-PCR等下游实验
2124A 病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,RNA 纯度高,质量可靠,可用于各种下游实验
RNA样品储存液 2126B RNAfixer 无液氮RNA样品储存液:同RNAlater,稳定和保护未冷冻样本中的RNA完整性
DNA消化试剂 2127A Dnase I 柱上消化试剂盒:快速消化硅胶膜上残留的DNA,无需实验后单独清除残留的DNA
2128A Dnase I 快速DNA消化试剂盒:对RNA中残留的DNA进行消化后用于反转录荧光定量PCR
RNA保护试剂 2129A RNA长期保存液:RNA 样品运输和中长期保存的最佳选择,可4℃过夜保存或-20℃保存至少1年
2130A Rnase抑制剂:用来保护RNA免受Rnase降解,用于RT等下游实验
RNA纯化试剂 2131B RNA清洁纯化试剂盒:纯化的总RNA 没有蛋白的污染,所得的RNA 可用于多种下游实验。