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TRI LS Reagent液体样品总RNA抽提试剂(TRIzol LS Reagent)

TRI Liquid Sample Total RNA Isolation Reagent(TRIzol LS Reagent)

包装规格：

本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍：
TRI LS Reagent液体样品总RNA抽提试剂，能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。适用于人，动植物，酵母，细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。也可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。在加入氯仿离心后，会分成三层，RNA 分布在上清水相层。收集上清水相后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。
可直接用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
适用广：适用于动物组织，植物组织，各种微生物和培养细胞等各类样品材料的RNA提取。
特殊性：适用于提取液体样品的总RNA。
易操作：操作简便，提取过程仅需 30 分钟左右。 
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 
样品处理：
1.生物液体：每250μl液体样品（血清，血浆，脑脊液等）加入750μl TRI LS Reagent，用移液器吹打混匀样品，裂解样品中细胞。每5~10×106 个细胞至少加入750μl TRI LS Reagent。确保TRI LS Reagent和样品的体积比总是3：1。
2.动物组织：取新鲜或－80°C冻存动物组织尽量剪碎，每50~100mg组织加入750μl TRI LS Reagent，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入750μl TRI LS Reagent混匀。如果组织样品的体积小于250μl，加入灭菌水将组织样品体积调整到250μl。确保TRI LS Reagent和样品的体积比总是3：1。
3.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRI LS Reagent中迅速研磨，每50~100mg组织加入750μl TRI LS Reagent，如果组织样品的体积小于250μl，加入灭菌水将组织样品体积调整到250μl。确保TRI LS Reagent和样品的体积比总是3：1。
4.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，按培养板面积每10cm2加入300~400μl TRI LS Reagent，用移液器吹打混匀，直到看不到明显的细胞团为止。裂解液加入量不足会有DNA污染。
5.悬浮细胞：离心收集细胞。每5 ~ 10×106动物、植物和酵母细胞或每1×107细菌细胞加入750μl TRI LS Reagent混匀。如果悬浮细胞液的体积小于250μl，加入灭菌水将组织样品体积调整到250μl。确保TRI LS Reagent和样品的体积比总是3：1。用移液器吹打混匀，直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤，避免mRNA降解。

提取步骤：
1.将匀浆样品剧烈震荡后，室温静置5分钟以使核蛋白体完全解离。
2.可选步骤： 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟，取上清。（当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要额外的分离步骤。）
3.每750μl TRI LS Reagent加200μl氯仿。盖紧管盖，剧烈震荡15秒并将其在室温静置3分钟。
4.在4°C 12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上清水相层，RNA存在于上清水相层中。
5.将上清水相转移到新的离心管中，加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温静置10分钟。（不要吸取沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。）
6.4°C 12,000 rpm 离心10分钟，弃上清，此时在管壁或管底形成胶装沉淀。
7.加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用750μl TRI LS Reagent用1ml 75%乙醇对沉淀进行震动涡旋洗涤。
8.在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟，弃上清，注意不要吸取RNA沉淀。剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸取沉淀。
9.室温静置2 ~ 3分钟。加入30 ~ 100μl RNase-free H2O，充分溶解RNA，得到的RNA保存在－80°C，防止降解。

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