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TRI LS Reagent(液体样品总RNA抽提试剂)|TRIZOL LS Reagent

TRI LS Reagent(液体样品总RNA抽提试剂)适用于多种属液体样品总RNA的提取,适用范围广,样品可来源于人、动物、植物、酵母、细菌、病毒、血清、血浆、全血、体液等;提取完整性好。TRI LS和液体样品的终体积比是3:1,TRzol LS (液体样本RNA抽提试剂)可以用于后续的RT-PCR、Northern blot分析dot杂交及体外转录等实验。

产品编号:2107

产品规格:50ml/100ml

产品价格:500/900

包装:

储存条件:4℃

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TRI LS Reagent(液体样品总RNA抽提试剂)| TRIZOL LS Reagent

RNA/DNA/protein Isolation Reagent For Liquid Sample


一. 产品介绍:
TRI LS Reagent是直接从来源于人,动植物,酵母,细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。也可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。 该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在TRIpure LS中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯*离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层有机相,RNA 分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、体外翻译等。

TRI LS Reagent能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb(28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb,18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。
TRI LS Reagent
二. 适用范围:
用于人,动植物,酵母,细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。

三. 储存条件:
TRIpure LS在室温下能稳定保存12个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在2~8℃的环境下。

四. 注意事项:
1.本品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触,应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

2.样品用TRIpure LS匀浆后,如果不即刻加入氯*之前,置于-70℃下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8℃可以保存一周,-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成cDNA,Northern Blot等。

3.若下游实验对DNA非常敏感,建议用 RNase free DNase I(货号:2128A)对RNA进行处理。

4.自备试剂:氯*、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、 RNase free water或者DEPC处理过的水。

5.本公司生产TRIpure Reagent LS质量优异,可以替代Invitrogen的Trizol Reagent LS。提取质量和下游实验一样。

五. 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:用TRIpure LS抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明,所有的操作应该在15~30°C的室温条件下。

1. 匀浆
a. 生物液体:
每0.25ml液体样品(血清,血浆,脑脊液等等)加入0.75ml TRIpure LS,用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×106个细胞至少加入0.75ml TRIpure LS。TRIpure LS 和液体样品的终体积比总是3:1。

b. 动物组织:
用glass或强力匀浆器搅匀组织样品,每50~100mg组织或者0.25ml 组织悬液加0.75ml 的TRIpure LS。一般50~100mg组织体积都要小于0.25ml,如果组织样品的体积小于0.25ml,加入灭菌水将组织样品体积调整到0.25ml以保证体积比例是3:1。

c. 单层生长细胞:
直接往直径3.5 cm 的培养板中加入0.3ml-0.4ml 的TRIpure LS裂解细胞,用加样枪吹打帮助充分裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIpure LS量(每10cm2加0.3-0.4ml)。不需要往裂解物里面加水,因为培养板中附着残留的培养液已经充分稀释了TRIpure LS。
注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出RNA,继续做即可。

d. 细胞悬液:
通过离心来沉淀细胞。在TRIpure LS试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加0.75ml 的TRIpure LS。和步骤b一样用灭菌水调节样品体积到0.25毫升。在加入TRIpure LS前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。

e. 植物组织:
取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIpure LS中迅速研磨,每50-100mg组织加入0.75ml TRIpure LS,和步骤b一样用灭菌水调节样品体积到0.25毫升,混匀。

2. 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。

3. 可选步骤: 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟,取上清。
如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时,上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。

4. 每0.75ml TRIpure LS加0.2ml 氯*。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。

5. 在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层:下层有机苯酚氯*层,中间层,上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIpure LS容量的70%。 (有机层和中间层是蛋白和DNA,如果需要提取,请联系我们索取提取方法)。

6. 将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。 

7. 在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟,弃上清。

8. 加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用0.75ml TRIpure LS用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。

9. 在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟,弃上清,注意不要丢失RNA沉淀。
注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。

10. 室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μl RNase free水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。


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送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。