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全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒(离心柱型)

改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶, 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品编号:2108

产品规格:20次/50次

产品价格:504/816

包装:

储存条件:4℃

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全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒(离心柱型)


一. 产品介绍:
改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶, 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

二. 产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独有的RLS裂解液配方,可直接裂解全血,不需要先裂解去除红细胞。
4.多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。

三. 适用范围:
适用于快速提取全血(液体样本)高纯度总RNA。

四. 储存条件:
1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。裂解液RLS可以常温运输,收到后4℃避光保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

五. 注意事项:
1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入。

2.所有离心步骤如未加说明,均在室温进行。使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

3.裂解液RLS和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,用户使用前需要自备氯仿。

5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。

6.检测OD260/OD280吸光度比值时,RNA样品应该溶于TE后检测,如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。

7.加入裂解液RLS后,加氯仿前,样品可在–60℃-70℃保存一个月以上。

8.关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留, 在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留(一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1)选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
4)在步骤去蛋白液RE漂洗前,直接在吸附柱RA上进行DNase I消化处理。

六. 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇! 

1.每0.25ml 液体样品(血清,血浆,脑脊液等等)加入0.75ml 裂解液RLS,用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×106个细胞至少加入0.75ml 裂解液RLS。裂解液RLS 和液体样品的终体积比总是3:1。

2.将样品剧烈震荡混匀,在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。

3.每0.75ml 裂解液RLS加0.2ml 氯仿,剧烈振荡15秒并室温下放置2分钟。

4.于4℃ 12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RLS体积的70%,把水相转移到新管中,进行下一步操作。

5.加入1倍体积70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!),颠倒混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内)。

6.12,000rpm 离心45秒,弃掉废液,将吸附柱重新套回收集管。

7.加500μl 去蛋白液RE,12,000rpm 离心45秒,弃掉废液。

8.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心45秒,弃掉废液。

9.加入500μl漂洗液RW,12,000 rpm 离心45秒,弃掉废液。

10.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11.取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在 65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water,离心1分钟,合并两次洗脱液。

洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积最好不少于30μl,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。

具体产品折扣价请邮件或电话咨询!


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2. 专业的引物设计技能,保证qPCR引物的特异性;

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qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。

RNA提取产品选择指南:

样品类别 编号 产品用途及优势
动物组织细胞 2101B RNASure Reagent:质量和效果同进口Trizol,价格最实惠
2102B 超纯总RNA快速提取试剂盒:质量同T公司DP419,Trizol+离心柱,速度更快,纯度更高,操作更简单,价格实惠
2103B 组织/细胞RNA快速提取试剂盒:质量同Q公司74104,无需酚/氯仿抽提,速度最快,有少量DNA残留,需加DNA酶消化
2104B EASY组织/细胞RNA快速提取试剂盒:同Q公司74134,无需酚/氯仿抽提,不用DNA酶消化,无DNA残留,15min提取的RNA可直接做qPCR 
血液样品 2107B TRI LS Reagent:液体样品RNA提取试剂,不用离心柱纯度差一点,对操作技术要求高,可用于新鲜血样的保存运输,之后再用2108B全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒提取RNA
2108B 全血(液体样本)快速总RNA提取试剂盒:用于-80℃冷冻抗凝全血总RNA提取,也可用于新鲜血样或2107B TRI LS Reagent保存运输的样品RNA提取
2109B 超纯全血总RNA快速提取试剂盒:新鲜全血总RNA提取重点推荐产品,RNA纯度高,操作简单
2110B EASY全血RNA快速提取试剂盒:同Q公司52304,无需酚/氯仿抽提,有少量DNA残留,需加DNA酶消化
2111A RNAstore Blood RNA Kit:仅用于保存在RNAfixer中常温或4℃运输后的抗凝全血RNA提取,提取产量高,纯度好
2112A PAXgene Blood RNA Kit:同BD 762165,集静脉采血、稳定核酸、提取纯化RNA一体,可常温运输保存
普通植物组织 2101B RNASure Reagent:质量和效果同进口Trizol,价格最实惠
2113B 通用植物总RNA快速提取试剂盒:可用于普通植物组织细胞RNA提取,Trizol+离心柱型,速度更快,纯度更高,操作更简单
多酚多糖植物组织 2114B 植物RNA快速提取试剂盒:质量同Q公司74904,无需酚/氯仿抽提,速度最快,操作简单,不带DNA酶柱上消化,适合做普通的反转录和克隆
2115B EASY植物RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,操作简单,带DNA酶柱上消化步骤来清除残留DNA,提取的RNA可以做qPCR
2116A EASY通用植物RNA提取试剂盒:质量同T公司DP432,无需酚/氯仿抽提,速度最快,操作最简单,带DNA酶柱上消化,提取的RNA可以做qPCR
2117A EASY多糖多酚/复杂植物RNA提取试剂盒:可以解决复杂多糖多酚,色素淀粉含量大,其他公司产品提取失败或产量低的复杂植物样品
纤维丰富组织 2118B 纤维类组织RNA快速提取试剂盒:效果同Q公司74704,适合心脏、骨骼肌、血管、气管、食管、眼球、皮肤、耳朵等纤维含量丰富的组织总RNA提取,使用Dnase I去除残留的基因组DNA
细菌样品 2119B 细菌RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单
2120B EASY细菌RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单,无DNA残留
真菌样品 2121B EASY真菌RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,操作简单,带DNA酶柱上消化步骤来清除残留DNA,提取的RNA可以做qPCR
酵母样品 2122B 酵母RNA快速提取试剂盒:不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单
病毒样品 2123A 病毒RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,RNA 纯度高,质量可靠,可用于PCR/RT-PCR等下游实验
2124A 病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒:无需酚/氯仿抽提,RNA 纯度高,质量可靠,可用于各种下游实验
RNA样品储存液 2126B RNAfixer 无液氮RNA样品储存液:同RNAlater,稳定和保护未冷冻样本中的RNA完整性
DNA消化试剂 2127A Dnase I 柱上消化试剂盒:快速消化硅胶膜上残留的DNA,无需实验后单独清除残留的DNA
2128A Dnase I 快速DNA消化试剂盒:对RNA中残留的DNA进行消化后用于反转录荧光定量PCR
RNA保护试剂 2129A RNA长期保存液:RNA 样品运输和中长期保存的最佳选择,可4℃过夜保存或-20℃保存至少1年
2130A Rnase抑制剂:用来保护RNA免受Rnase降解,用于RT等下游实验
RNA纯化试剂 2131B RNA清洁纯化试剂盒:纯化的总RNA 没有蛋白的污染,所得的RNA 可用于多种下游实验。