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细菌RNA提取试剂盒(离心柱型,gDNA Eraser)

Bacteria RNA Extraction Kit with gDNA Eraser(Column)

包装规格：

本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍：
细菌RNA提取试剂盒(离心柱型,gDNA Eraser)，适用于快速提取细菌总RNA。可在30分钟左右，无需苯酚、氯仿等有机试剂提取总RNA。结合高效的gDNA过滤技术，可高效去除基因组DNA，纯化得到的RNA几乎不含DNA污染，采用多次柱漂洗的方式，可提取没有蛋白、细胞代谢物等杂质污染的高纯度、高质量的总RNA。 

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

产品特点：
无污染：整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性：适用于提取细菌的总RNA。
易操作：操作简便，提取过程仅需 30 分钟左右。 
安全性：无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱：含有特异性吸附柱。通过漂洗－离心－洗脱的步骤提取。
高质量：有效保证RNA的完整性，回收RNA 效率高，纯度高，没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2，可用于各种分子生物学实验。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
样品处理：
1.离心收集1ml菌液（约108~109细胞）到一个1.5ml离心管，去除上清，残留的上清不能超过20μl。
2.根据细胞的种类和数量，充分重悬细胞加入100μl TE（需先加入溶菌酶，终浓度为1mg/ml）。
3.室温条件下静置5分钟。每2分钟涡旋振荡10秒帮助破壁。
根据不同细菌类型和破壁难易程度，选择合适的溶菌酶、工作浓度和温育温度、时间等，还可以使用玻璃珠击打、机械破壁、蛋白酶K消化等方法帮助破壁。

提取步骤：
1.短暂离心收集细胞到管底，弃掉上清。涡旋振荡重悬分散细胞。
2.加入500μl裂解液RLT Plus，吹打混匀后剧烈振荡20秒。
3.如果有明显的团块或者不溶物可以将裂解物13，000rpm离心3分钟， 将裂解物上清全部转到一个新离心管再进行下一步。
4.转入套有基因组DNA清除柱DA的离心管，13,000 rpm离心60秒，保留滤过液（RNA在滤过液中）。
5.在滤液中加入等体积的70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇），立即吹打混匀。
6.将混合溶液（每次小于700μl，可分两次加入）转入套有吸附柱RA的离心管中，13,000 rpm离心60秒，弃掉废液。
7.加入700μl 去蛋白液RW1，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
8.加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
9.重复步骤8一次。
10.将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液），放入新的RNase-free离心管中，在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O，室温静置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟，取得RNA后，将RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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