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快捷型植物基因组DNA提取试剂盒(溶液型)

Quick Plant DNA Isolation Kit(Solution)

包装规格：

一.产品介绍：
本试剂盒采用独特的缓冲液系统，特别适合从植物干粉或者新鲜植物材料中提取基因组DNA。无需酚/氯仿抽提，使用安全方便，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。对样品的起始重量没有限制，实验者可根据自己的需求灵活调整。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。

二.产品特点：
1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。
2.快速，简捷，操作整个过程可在1个小时内完成。
结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。

三.储存条件：
1.缓冲液AP1、AP2低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃-65℃水浴几分钟帮助重新溶解，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

四.注意事项：
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.用户需自备异丙醇、70％乙醇、液氮研钵、水浴箱。
3.开始实验前将需要的水浴先预热好备用。
4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的量，请联系我们索取其它处理量的操作手册。

五.操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
1.取适量植物组织（新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2.转移细粉到一个1.5ml离心管，不要解冻，加入400μl缓冲液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)，旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。
如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。

3.65℃水浴10分钟，在水浴过程中颠倒离心管2-3次，混合样品。

4.加入130 μl 缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置5分钟， 14,000 rpm 离心5 分钟，小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管，注意不要吸到界面物质。

5.可选步骤：将上清液再次14,000 rpm (~13,400×g )离心5 分钟，小心缓慢吸取上清到一个新的1.5ml离心管中，不要吸到沉淀。
此步骤目的为去除上清液中的沉淀杂质，使提取基因组DNA 纯度更高。

6.加入0.7体积的室温异丙醇（例如500μl的上清液加350μl 异丙醇），颠倒30次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色DNA沉淀。

7.12,000rpm离心2分钟，在管底可以见到白色的DNA沉淀块，倒弃上清。

8.加入1ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀，12,000rpm离心1分钟， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。
注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。

9.加入适量DNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。

10.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。