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CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型)

改进的经典CTAB植物DNA抽提液内(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质(根据需要,上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA,进一步去除其它各种杂质),然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品编号:2516

产品规格:50次/100次/200次

产品价格:480/768/1380

包装:

储存条件:4℃

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植物基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型)


一.产品介绍:
改进的经典CTAB植物DNA抽提液内(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质(根据需要,上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA,进一步去除其它各种杂质),然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

二.产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达30 kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。

三.适用范围:
   适用于快速提取植物基因组DNA.

四.储存条件:
1.裂解液PL、结合液PQ或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在55℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

五.注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3.需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比24:1混合)、无水乙醇和β-巯基乙醇。
4.结合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。
6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱 (10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积,如果样品DNA含量低或者产量低,需要扩大提取量,还需要另外购买溶液。

六.操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
    提示:
         第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量的无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
         取所需适量裂解液PL放置在65℃预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。


1.取适量植物组织(新鲜组织100 mg 或干重组织30 mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。


2.转移细粉到一个1.5ml离心管,不要解冻,加600μl 65℃预热的裂解液PL (确认已加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。


3.65℃水浴20-60分钟,在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
可选:如果组织干燥或者产量低,可以适当延长水浴时间。如果RNA残留多,可在水浴前加入6μl RNA酶(20mg/ml)。
:如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾,条带扭曲,背景很高等不正常电泳情况,可以加1% RNA酶(10mg/ml)37℃或者室温放置半小时即可消化RNA,消化完后不需要特殊处理便可用于PCR或者酶切。


4.加入700μl氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比24:1混合),颠倒充分混匀几分钟(或者涡旋混匀),13,000rpm 离心5分钟。
若提取的植物组织富含多糖多酚,可以在第4步前用等体积酚/氯仿(1:1)抽提一遍。


5.小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管,注意不要吸到界面物质。
如上清比较浑浊,则需要重复步骤4一遍,直到得到透亮上清。


6.较精确估算上清量,加入1.5倍体积结合液PQ (请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。


7.将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液(先加700μl离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。


8.加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm 离心30秒,弃废液。


9.加入600μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。


10.加入600μl漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。


11.将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。


12.取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热),室温放置3-5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。


13.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。

附录(低DNA含量或者产量低样品操作步骤):
1.取适量植物组织(新鲜组织400 mg 或干重组织200 mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
2.转移细粉到一个15ml离心管,不要解冻,加入9ml 65℃预热的裂解液PL (确认已经加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
3.室温放置60分钟,中间不时颠倒离心管以混合样品数次。
如果组织干燥或者产量低,可以放置在65℃水浴。
4.加4.5ml氯仿/异戊醇(体积比24:1混合),涡旋充分混匀,3,000g 离心10分钟。
5.小心吸取上清到一个新的15ml离心管,注意不要吸到界面物质。重复一遍步骤4。
6.小心吸取上清到一个新的15ml离心管,估算上清量,加入0.7倍体积的异丙醇,涡旋混匀来沉淀DNA。
7.立刻3,000g 离心20分钟沉淀DNA,弃上清,颠倒离心管口放在纸巾上控干残留液体,并小心用用移液枪吸干沉淀周围残留液体(不要过于干燥DNA沉淀)。
8.加入300μl-400μl预热到65℃的灭菌水,重新溶解DNA,可能需要在65℃短暂温育帮助溶解,期间不断轻弹管底帮助溶解。
9.加入1.5倍体积结合液PQ(450μl-600μl,请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。
10.后续步骤和上面标准操作步骤7开始后完全一样。