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miRNA SYBR Green qPCR Mix

miRNA荧光定量PCR检测试剂盒

产品介绍：
miRNA荧光定量PCR检测试剂盒采用本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA 荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA 荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是专门为miRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR 检测试剂，其中的DNA polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式， 配合特殊的Buffer 体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。
注：该试剂盒须与 miRNA cDNA Synthesis Kit(miRNA第一链合成试剂盒)（4205A）配套使用。

产品存储：
-20 ℃ 避光保存至少6个月，使用前充分融解混匀。2 x miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在4 ℃，避免反复冻融。Reverse primer(10μM )每次用完置-20 ℃保存。

需自备的试剂：
1.分子生物学实验级别的水（无核酸酶）
2.待检测miRNA对应的qPCR上游引物（Forward primer）

Forward Primer设计原则：
1.遵循引物设计的最普遍原则。
2.以成熟的miRNA 序列为基础，将U 替换成T，这是最基础和最简单的设计方法。
3.试剂盒中提供的下游引物的Tm 值为65℃，设计上游引物的Tm 值要尽量保证在65℃左右。
4.若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过低，可以在引物的5’端添加几个碱基（最好为G 或C 碱基）；也可以在3’端添加1 个或几个A 碱基；或者5’端和3’端同时修饰。
5.若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过高，可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。

注意事项：
1.miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过real time PCR 体积1/10。
2.对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（10倍或者100倍）。
3.本品中含有荧光染料Sybr Green I，保存本品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4.2 x miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，配套ROX产品货号为PC38 Rox Reference Dye。

操作步骤：
1. 在室温融化2 x miRNA qPCR Mix和Reverse primer（10μM）。
2. 使用时请将2 x miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。注：请不要使用振荡器混匀。
3. 按照下表组分冰上进行反应液的配制