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PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒

【包装规格】

【保存条件】

本产品2-8℃避光保存，有效期 6个月。Lambda DNA standard 如需长期保存可置于–20°C 。

【产品简介】

PicoGreen 是一种特异性结合双链 DNA（dsDNA）的饱和荧光染料。其激发波长约 480–488 nm（常用 480 nm），发射波长约 520–523 nm（与核酸结合后峰约 502/523 nm），与大多数荧光计和荧光酶标仪兼容。该染料仅与 dsDNA 结合后才发出荧光，无 DNA 时不发荧光；所产生的荧光强度与 dsDNA 浓度成正比，且无序列依赖性。它基本不受游离核苷酸、单链 DNA（ssDNA）和 RNA 的影响，非常适合于溶液中 dsDNA 的定量检测。

【产品特点】

1. 高灵敏度：可检出低至 25 pg/mL 的 dsDNA（200 μL 检测体积下约 5 pg），较传统 A260 紫外吸收法灵敏近千倍。

2. 高特异性：仅与 dsDNA 结合发光，基本不受 ssDNA、RNA、游离核苷酸及蛋白质干扰；在等摩尔 ssDNA/RNA 存在下测定 dsDNA 影响很小。

3. 宽线性范围：1.25–80 ng/mL 内 R²>0.99，整体定量范围跨越 4 个数量级（25 pg/mL – 1000 ng/mL）。

4. 良好耐受性：对核酸制备中常见的盐、有机溶剂、去垢剂、蛋白质及琼脂糖等污染物耐受性较好。

5. 操作简便：无需纯化与分离步骤，染料工作液与样品混匀、避光孵育数分钟即可读数，适合高通量与自动化。

6. 平台兼容：适配荧光计（Qubit® 等）、荧光酶标仪；亦可兼容部分带 FAM/SYBR 通道的实时荧光定量 PCR 仪进行终点读数。

7. 药典认可：2010 版《中国药典》生物制品残留 DNA 检测标准方法之一，被多家生物制品企业采用。

【操作步骤】（实验前请先阅读注意事项）

1. dsDNA 标准品工作液配制：

a. 母液：取标准品（1 mg/mL）10 μL 加入 990 μL 1× TE，稀释成 10 μg/mL；再取 10 μL（10 μg/mL）加入 990 μL 1× TE，稀释成 100 ng/mL。

b. 倍比稀释：取 800 μL（100 ng/mL）标准品 + 200 μL 1× TE → 80 ng/mL；取 500 μL（80 ng/mL）+ 500 μL 1× TE → 40 ng/mL；依次倍比稀释，配成 20、10、5.0、2.5、1.25 ng/mL 系列标准品工作液。

2. 染料工作液配制：

取 PicoGreen 原液（200× in DMSO）按 1:100 用 1× TE 缓冲液稀释，配制成 2× 染料工作液。由于试剂易吸附玻璃表面，请在塑料容器中配制，并尽量避光；工作液最好配制后数小时内使用。

3. 标准曲线绘制：

将倍比稀释后的各梯度标准品工作液与 2× 染料工作液按 1:1 体积混匀（如各 100 μL，具体体积依仪器与容器而定），避光、室温放置 5 min。使用荧光仪检测：以 1× TE 为空白对照，设定激发波长 480 nm、发射波长 520 nm，在恒定温度下测定样品与空白荧光值。以（荧光值 − 空白）对标准品浓度（ng/mL）进行线性回归，绘制标准曲线。

4. 待测样品浓度测定：

【结果分析】

1. 以标准品浓度（ng/mL）为横轴、扣除空白后的荧光强度为纵轴进行线性回归，得到标准曲线方程 y = a*x + b（R²>0.99 为合格）。待测样品浓度 x = (y_样品 − b) / a，再乘以样品稀释倍数。

2. 线性最佳区间：1.25–80 ng/mL；有效定量范围：25 pg/mL – 1 μg/mL。若样品荧光超出线性上限，应将样品稀释后重新测定并计入稀释倍数；若低于检测下限，可适当增大样品体积或浓缩后测定。

【注意事项】

1. 本产品仅用于科研，禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量避光操作，以减缓荧光淬灭。

3. 染料工作液最好现配现用，以保证最佳结果；配制后建议数小时内使用完毕。

4. 荧光强度受温度影响较大，绘制标准曲线与样品测定应在同一恒定温度下进行（建议室温，混匀后避光孵育 2 min 再读）。

5. 标准品与样品混匀时避免涡旋产生气泡；比色皿侧面请勿标注，以免影响荧光信号采集。

6. 原液为 DMSO 溶液，2–8℃ 避光保存、避免反复冻融；DMSO 为可燃液体，请远离热源与明火，存放于通风良好处。

7. 染料易吸附于玻璃表面，请使用塑料容器配制，并避免与玻璃器皿长时间接触。

8. 本试剂经皮肤可吸收，操作时请穿实验服、戴一次性手套；避免接触眼睛与皮肤，如接触立即用大量水冲洗。