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PCR-LDR连接酶检测SNP分型|SNP基因分型

PCR-LDR连接酶检测SNP分型|SNP基因分型

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技术原理:主要应用连接酶检测反应 (ligase detection reaction,LDR)技术。即在Taq DNA连接酶的作用下, 当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列完全互补,并且两条探针之间没有空隙时才能发生连接反应,否则连接反应不能进行,最后通过荧光扫描片段长度,根据测序峰移动的胶位置,通过末端未标记探针的3个碱基差异,确定同一位点的不同基因型,再通过末端未标记探针的7个碱基差异,确定不同位点,最终实现对SNP 位点的精确检测。

原理及流程示意图:


PCR-LDR技术流程:
1. 多重PCR扩增:获得目标位点所在的片断;
2. 多重LDR:得到长度各异的检测产物;
3. 3730测序仪检测:根据测序电泳得到不同的峰值;
4. 判断SNPs结果,数据分析;

方法特点:
1. 通用性强:适用任何多态性位点和各种SNP位点的分型,不需要人工引入酶切位点; 
2. 分型准确,检出率高:其准确度可达99.2%以上。
3. 检测快速:LDR技术的最大优点就是实验时间短!与Taqman、RFLP、SSCP和DHPLC相比,由于检测条件更易控制,从DNA样本到数据的产出,整体实验只需要几周。

适宜范围:适宜 100-1000个样品,1-5个位点;


订单点击下载:SNP基因分型订单表


客户需要提供:
1. 细胞,组织或血液等样品材料,基因组DNA提取费用单独收费;
2. 基因组DNA(体积≥30μl,浓度≥50 ng/μl),纯度 OD260/280 为1.7~1.9之间;
3. 人类基因组需提供SNP位点的RS号。其它物种如牛、鸡、鱼等无rs号的,需提供SNP位点上下游各200bp的确切序列,SNP位点的突变类型,以及位点的上下游25bp内是否存在其它连锁位点。

最终提交结果:
1. SNPs结果(ExceL表格);
2. 完整实验报告:扩增和反应体系、所涉及的引物、探针序列;

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