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All-in-One HT First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式高温55℃第一链反转录试剂盒

本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失,与M-MuLV 相比,具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。

产品编号:P4208

产品规格:50T/100T

产品价格:500/900

包装:

储存条件:F

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All-in-One HT First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式高温55℃第一链反转录试剂盒


产品规格:

货号 产品名称  规格 目录价
P4208-25 All-in-One HT First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式高温55℃第一链反转录试剂盒
50T 900
P4208-100 All-in-One HT First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式高温55℃第一链反转录试剂盒
100T 1500


产品介绍:

      本制品以RNA为模板,采用预混合技术,用5 × TRUE Reaction Mix(已经预混合了TRUEscript Hˉ RTase/RNase Inhibitor Mix)高效合成第一链cDNA,操作简单。制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶TRUEscript Hˉ RTase。 野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失,与M-MuLV 相比,具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。


产品特点:
合成cDNA片段长度最高可达12 kb。

适用范围:
第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

使用方法:
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例) :
1.加入:
Components Volume
Total RNA/mRNA 50 ng-5 μg/5-500 ng
5× RT Reaction Mix  4 μl
RNase free H2O to final volume  20 μl


2. 轻轻混匀
真核生物,42℃孵育30-50 min(如产物用于qPCR,42℃孵育15-20 min)


原核生物,25℃孵育10 min,42℃孵育30-50 min(如产物用于qPCR,42℃孵育15-20 min)

3. 85℃加热5 min 失活TRUEscript Hˉ RTase。

4. 得到的cDNA产物可立即用于PCR或qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。

RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。丰度高的可以酌情适当稀释cDNA后使用。


注意事项:
1.避免RNase污染。
2.为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3.4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix  非常粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心后使用,并且避免吸头外壁沾附损失。