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First Strand cDNA Synthesis Kit With gDNA Eraser

产品规格：

货号	产品名称	规格	目录价
4203A	First Strand cDNA Synthesis Kit With gDNA Eraser	50T	750
4203B	First Strand cDNA Synthesis Kit With gDNA Eraser	100T	1290
4203C	First Strand cDNA Synthesis Kit With gDNA Eraser	1000T	10900

产品介绍：

本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录系统。本试剂盒为一管式反转录预混Mix，5 × TRUE RT MasterMix 中含有反转录第一链合所需的所有试剂（TRUEscript Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer）。 通常Real Time RT-PCR等实验需要先用DNase I消化去除RNA中残留的基因组DNA(gDNA) ，但是传统DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损失。本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊 4 × gDNA Eraser Mix 2分钟消除gDNA残留，不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。 

产品存储：－20℃ 保存，有效期12个月

适用范围：第一链cDNA合成，去除RNA中残留的gDNA，可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

产品特点：

不需要传统繁琐的DNase I消化，采用gDNA Eraser Mix极大简化了DNA残留的清除流程。全预混的反转录mix和gDNA Eraser Mix大大减少了加样工作量和降低RNA污染几率。同时2种mix在-20℃不冻结可以直接使用，节约了化冻和混匀时间，使用方便。 特殊优化的oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。反转录效率高。只需42℃，20 min即可完成cDNA第一链的合成。合成cDNA片段长度最高可达12 kb。

操作步骤：

第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1.在RNAse free管里面加入以下成分:(建议使用PCR管并在PCR仪器上进行)

Components	Volume
Total RNA/mRNA	≤ 12 μl *
4 × gDNA Eraser Mix	4 μl (见注意事项3)
RNase free H2O to final volume	to 16 μl（补足到总体积16 μl）

* Total RNA不超过2 μg，mRNA不超过200 ng (20μl体系)

2. 轻轻混匀，42℃孵育2分钟（或者37℃孵育5分钟）。

3. 瞬间离心收集反应液至管底，置冰上，继续在同一管加入如下成份：

Components	Volume
5 × TRUE RT MasterMix	4 μl (见注意事项3)

4. 轻轻混匀（总体积20 μl）
如使用mRNA模板是来源于真核细胞（如人、小鼠的组织细胞）含有Poly(A)尾结构，42℃孵育15-20 min。

如使用mRNA模板是来源于原核细胞（细菌）或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25℃孵育10 min，42℃孵育15-20 min。

5. 85℃加热 5 min 失活TRUEscript Hˉ RTase和gDNA Eraser。

6. 置冰上，合成的cDNA可以用于下一步荧光定量PCR。需较长时间保存时，请于-70℃保存，避免反复冻融。

RT-qPCR：

取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板或者根据需求调节使用量。若后续实验为实时荧光定量PCR，逆转录产物的加量应不超过PCR体系终体积的1/10，例如50 μl 的PCR反应体系，逆转录产物的加量应不超过5 μl。按照厂家荧光定量PCR试剂说明书进行下一步荧光定量PCR。

注意事项:
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix  非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。