M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)-RT-PCR相关产品-Genenode|君诺德公司

M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)

产品规格：

货号	产品名称	规格	目录价
P4201A-5	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	5KU	210
P4201A-10	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	10KU	390
P4201B-5	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	5KU	300
P4201B-10	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	10KU	500

一、产品介绍：
本制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶TRUEscript Hˉ RTase。野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。

二、适用范围：
第一链cDNA合成。可用于低拷贝基因的检测。

三、特点：
合成cDNA片段长度最高可达12 kb。

四、第一链cDNA合成：(以20 μl反应体系为例)
1.加入

Components	Volume
Total RNA/mRNA	50 ng-5 μg/5-500 ng
Oligo(dT)₁₈(0.5 μg /μl)or	1 μl
Random Primer(0.1 μg/μl) or	1 μl
GSP(Gene Specific Primer)	2 pmol
dNTP Mixture (10 mM each)	1 μl
5× RT Buffer	4 μl
RNase Inhibitor(40 units/μl)	0.5 μl
TRUEscript Hˉ RTase	0.8-1μl (见注意事项4)
RNase free H₂O to final volume	20 μl

2. 轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
3. 65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活TRUEscript Hˉ RTase。

五、RT-PCR：
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
建议PCR条件(以50 μl反应体系为例)

Components	Volume	Final Concentration
cDNA Template	2 μl	as required
Forward Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)	5 μl	1×
2.5 mM dNTPs	4 μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5 μl	2.5 units
ddH2O to final volume	50 μl	Not applicable

七、注意事项：
1.避免RNase污染。
2.为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3.如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
4.TRUEscript Hˉ RTase非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可以每次按照0.8μl使用，也不影响使用效果。

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