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First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)

产品规格：

货号	产品名称	规格	目录价
P4202-50	First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)	50T	700
P4202-100	First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)	100T	1200
P4202-1K	First Strand cDNA Synthesis Kit(第一链反转录试剂盒)	1000T	10000

产品介绍：

      本制品以RNA为模板，采用预混合技术，用5 × TRUE Reaction Mix（已经预混合了TRUEscript Hˉ RTase/RNase Inhibitor Mix）高效合成第一链cDNA，操作简单。制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶TRUEscript Hˉ RTase。 野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。

产品特点：
合成cDNA片段长度最高可达12 kb。

适用范围：
第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

使用方法：
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例) ：
1.加入：

Components	Volume
Total RNA/mRNA	50 ng-5 μg/5-500 ng
反转录引物	1 μl
5× RT Reaction Mix	4 μl
RNase free H2O to final volume	20 μl

注：真核生物mRNA带Poly A尾和一些带Poly A尾的病毒RNA，反转录引物可以选择Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)，原核生物或者不带Poly A尾的病毒mRNA无法使用Oligo dT，因此反转录引物只能选择Random Primer N6(0.1 μg/μl) 。 

2. 轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)42℃孵育30-50 min（如产物用于qPCR，42℃孵育15-20 min）

如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min（如产物用于qPCR，42℃孵育15-20 min）

3. 85℃加热5 min 失活TRUEscript Hˉ RTase。

4. 得到的cDNA产物可立即用于PCR或qPCR反应，或在-20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。

RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。丰度高的可以酌情适当稀释cDNA后使用。

注意事项:
1.避免RNase污染。
2.为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3.4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix  非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。