植物叶片直接PCR试剂盒
Plant Leaf Direct PCR Kit
一.试剂盒组成、储存、稳定性：
|
试剂盒组成
|
保存
|
P4402‑100
|
P4402‑500
|
|
|
|
100T×20 µL
|
500T×20 µL
|
|
2 x Fast Direct PCR Mix
|
-20℃
|
1 mL
|
5 x 1 mL
|
|
Quick Extract Buffer A
|
-20℃
|
0.5 mL
|
2.5 mL
|
|
Quick Extract Buffer B
|
-20℃
|
1 mL
|
5 mL
|
|
Quick Extract Buffer C
|
-20℃
|
5 mL
|
25 mL
|
二.产品介绍：
本试剂盒可以在15‑20分钟内，从植物叶片中直接分离基因组DNA 用于PCR扩增检测。该方法不需要用复杂的仪器，以及各种专用的核酸基因组DNA提取试剂盒来提取纯化基因组DNA，该试剂盒也可以直接对提取好的基因组DNA进行PCR扩增。
三.产品特点：
1．Easy：快速制备的基因组DNA，可以用2 x Fast Direct PCR Mix直接上机检测。
2．Quick：可以在30‑40分钟内一步制备多种材料的基因组DNA。
3．Versatile：可以处理各种植物叶片样品。
4．Sensitivity：只需及其微量的基因组DNA即可反应。
5．Specificity：适用于各种PCR反应，扩增速度快，扩增产量高，具有高扩增效率、高扩增产量、高保真度等特点，可以快速、准确地对目的基因进行PCR扩增。
四.适用范围：
适用于植物叶片的快速基因组DNA制备，用于PCR扩增，具有高扩增效率、高扩增灵敏度、高扩增特异性的特点，可以快速、准确地对目的基因位点进行PCR扩增。
五.储存条件：
‑20℃长期保存，避免反复冻融。
六.用户自备：
金属浴，PCR仪，上下游引物，ddH2O，10% PVP40。
七.注意事项：
1.本产品仅供研究用，请勿用于人体及动物、临床诊断或作为食品、化妆品、家庭用品的添加剂等用途。
2.如果扩增条带较弱，适当增加减少模板加入量，模板加入量0.5‑3 μL，模板加入太多，反而抑制PCR反应。
3.如果样品多酚多糖较多，扩增效果不理想，可在20 μL PCR反应体系加入2 μL 10% PVP40改善效果。
4.如果非特异扩增较多，可调整退火温度，或者适当增减模板用量。
5.各溶液使用完毕后，应该立刻盖紧盖子，以免PH改变影响质量。
八.植物DNA制备:
1．准备无酶PCR管，8联排，1.5 mL EP管，加入制备好的植物组织样品：
方案1：采用打孔器(或剪刀)取植物叶片新鲜幼嫩组织3‑5 mg，大约直径 5‑7 mm 叶片组织(如：水稻、小麦、烟草、玉米、大豆、油菜、棉花等)。
方案2：采用打孔器(或剪刀)取植物叶片新鲜幼嫩组织30‑50 mg，置于装有3颗3 mm研磨珠(货号A2712‑3)的2 mL圆底离心管或专用研磨管中，使用组织研磨仪在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状，实验时取2‑3 mg组织匀浆。
2．根据实验样品数量，预先配置下表反应体系，确保每个样品孔2.5 µL Quick Extract buffer A，5 µL Quick Extract buffer B，42.5 µL ddH2O混匀后分配到PCR管，8联排，1.5 mL EP管或者96孔板中。
|
反应体系
|
每孔体积
|
反应温度和时间
|
|
Quick Extract Buffer A
|
2.5 µL
|
98℃，15‑60min
|
|
Quick Extract Buffer B
|
5 µL
|
|
ddH2O
|
42.5 µL
|
3．对PCR仪设置反应程序：98℃加热15‑30 min，难裂解的样品98℃加热30‑60 min，之后冷却降温到15℃。
4．排枪加入50 µL Quick Extract buffer C，吹打混匀，微量离心管13,000 rpm离心1‑2 min，台式离心机离心96孔板，4,000 rpm离心5 min。
5. 吸取离心后上清液转移到干净的PCR管或EP管中，取2 µL上清液进行PCR扩增，DNA浓度太高时吸取部分上清液稀释5‑10倍使用。
6．取5‑10 µL上清液电泳检测（1%琼脂糖），其余上清液可分几份保存至‑20℃，尽量避免反复冻融。
注意：本产品仅供研究用，请勿用于人体及动物、临床诊断或作为食品、化妆品、家庭用品的添加剂等用途。
