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鼠尾直接PCR试剂盒
Mouse Tail Direct PCR Kit

一.试剂盒组成、储存、稳定性：

Contents	Storage	P4404‑100	P4404‑500
		100T	500T
2 x Fast Direct PCR Mix	-20℃	1 mL	5 mL
Quick Extract buffer A	-20℃	4 x 2 mL	5 x 8 mL
Quick Extract buffer B	-20℃	4 x 2 mL	5 x 8 mL

二.产品介绍：
本试剂盒可以在15‑30分钟内，从微量动物组织中直接分离基因组DNA 用于PCR扩增检测。该方法不需要用复杂的仪器，以及各种专用的核酸基因组DNA提取试剂盒来提取纯化基因组DNA，该试剂盒也可以直接对提取好的基因组DNA进行PCR扩增。

三.产品特点：
1．Easy：快速制备的基因组DNA，可以用2 x Fast Direct PCR Mix直接上机检测。
2．Quick：可以在15‑20分钟内一步制备多种材料的基因组DNA。
3．Versatile：可以处理培养细胞和微量动物组织等多种样品。
4．Sensitivity：只需及其微量的基因组DNA即可反应。
5．Specificity：适用于各种PCR反应，扩增速度快，扩增产量高，具有高扩增效率、高扩增产量、高保真度等特点，可以快速、准确地对目的基因进行PCR扩增。

四.适用范围：
适用于培养细胞和微量动物组织的快速基因组DNA制备，用于PCR扩增，具有高扩增效率、高扩增灵敏度、高扩增特异性的特点，可以快速、准确地对目的基因位点进行PCR扩增。

五.储存条件：
‑20℃长期保存，避免反复冻融。

六.用户自备：
PCR仪，上下游引物，ddH2O

七.DNA准备:
1．新的PCR管中可加入如下样品：
动物组织，用液氮或研磨杵研磨处理，取厚度约1 mm，长宽约2‑3 mm的动物组织块，如鼠尾，鼠耳，肌肉等动物组织。

2．每个样品孔60‑80 µL Quick Extract buffer A，混匀后分配到PCR管，8联排，EP管中，吹打混匀样品，确保样品分散悬浮。

3．对PCR仪或金属浴设置反应程序：60℃，60 min，98℃加热20‑30 min，冰浴冷却1 min。

4．排枪加入60‑80 µL Quick Extract buffer B，吹打混匀，微量离心管13,000 rpm离心1‑2min。

5．吸取离心后透明上清液转移到干净的PCR管或EP管中，取1‑2 µL上清液进行PCR扩增，上清液DNA浓度过高时吸取部分上清液稀释5‑100倍使用，DNA过高会抑制PCR扩增，稀释液可用10mM Tris‑HCl(PH 8.0‑8.5)或者TE buffer(PH 8.0‑8.5)。

6．上清液4℃可以保存3‑5天，‑20℃可延长保存时间，尽量避免反复冻融。

八.PCR流程：
1、溶解引物，震荡混匀，短暂离心，将引物和mix溶液甩至管底；

2、按下列组份配制PCR反应液，将除模板以外的试剂混成mix，分装到PCR管内，最后加模板DNA，充分混合，短暂离心溶液至管底。

PCR体系	20 µL反应体系
2 x Direct‑PCR Mix	10 µL
Forward Primer (10µM)	0.5 µL
Reverse Primer (10µM)	0.5 µL
Nuclease‑free ddH2O	x µL
基因组DNA上清液	1‑2 µL
总体积	20 µL

备注：
a.DNA模板的添加量通常在30‑80 ng/µL，因不同种类的DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定最佳的DNA模板添加量，一般情况加2 µL基因组DNA上清液。

b. 上下游引物终浓度在0.1‑1µM范围内优化，扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度，发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

3、在PCR仪上进行如下反应：

步骤	温度	时间	循环数Cycles
预变性	95℃	3min	1
变性	94℃	20 sec	35‑40
退火	55‑65℃	25 sec
延伸	72℃	45‑60 sec / kb
终延伸	72℃	5 min	1
终止	4‑8℃	∞	∞

4、结果检测：反应结束，取5 µL反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

注意：本产品仅供研究用，请勿用于人体及动物、临床诊断或作为食品、化妆品、家庭用品的添加剂等用途。