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Basic-DNA恒温快速扩增试剂盒(基础型)

包装规格：

用于DNA扩增，电泳检测

一.技术介绍：

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA，在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下，侵入双链DNA模板；在侵入位点形成D-loop区域，并开始对DNA双链进行扫描；待找到与引物互补的目的区域后，复合体Rec/ssDNA解体的同时，聚合酶也结合到引物的3’末端，开始链的延伸。

二.产品特点：

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需30 mins）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。
金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

三.引物设计：

1. 建议使用长度在30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；

2. 碱基排布随机性高，GC 含量在 30%-70%之间；

3. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增；

4. 扩增子长度建议在150-300 bp，通常不超过500 bp。

四.操作步骤：
提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。

1. 每个干粉反应管加入32.9 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2. 每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物浓度10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；

3. 向反应管中依次加入8.6 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为10.6 μL）; 

4. 最后向反应管中加入2.5 μL B Buffer并充分混合（对于多个反应，建议将B Buffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀）；

5. 混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育30 mins；

6. 反应结束后，加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反应溶液，12000 rpm离心5 min，取5 μL上清进行电泳检测或者使用DNA产物纯化试剂盒进行处理，货号：P2303，50次，PCR产物纯化回收试剂盒。

*正对照反应单元体系配制：阳性/阴性对照模板加入2μL，正对照引物C Buffer（包含上/下游引物）加入4 μL，其他组分参照体系配制A Buffer 32.9 μL，ddH2O 8.6 μL，B Buffer 2.5 μL，总体积50 μL。

注意事项：
1．由于试剂盒灵敏度非常高，在进行反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2．试剂盒保质期12个月。每次使用时，请取出实验所需的MIRA反应单元的数量，置于冰浴条件下并在8小时内使用；剩余部分，请置于存储条件下。