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Basic-DNA恒温快速扩增试剂盒(基础型)

RPA,恒温DNA扩增酶,恒温DNA扩增酶,Basic

产品编号:Basic

产品规格:48次

产品价格:2400

包装:

储存条件:-20℃

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Basic-DNA恒温快速扩增试剂盒(基础型)

用于DNA扩增,电泳检测

一.技术介绍:

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下,侵入双链DNA模板;在侵入位点形成D-loop区域,并开始对DNA双链进行扫描;待找到与引物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA解体的同时,聚合酶也结合到引物的3’末端,开始链的延伸。


二.产品特点:

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需30 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。
金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。


三.引物设计:

1. 建议使用长度在30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;

2. 碱基排布随机性高,GC 含量在 30%-70%之间;

3. 引物设计避免形成二级结构而影响扩增;

4. 扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp。


四.操作步骤:
提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。

1. 每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2. 每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物(引物浓度10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3. 向反应管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为14.1 μL); 
4. 最后向反应管中加入2.5 μL B Buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B Buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5. 混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育30 mins;
6. 反应结束后,加入50 μL酚/氯仿,1:1抽提反应溶液,12000 rpm离心5 min,取5 μL上清进行电泳检测或者使用DNA产物纯化试剂盒进行处理,货号:2303A,50次,PCR产物纯化回收试剂盒。

*正对照反应单元体系配制:正对照模板加入2μL,引物加入4 μL正对照引物Mix(包含上/下游引物),其他组分参照体系配制。


注意事项:
1.由于试剂盒灵敏度非常高,在进行反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2.试剂盒保质期12个月。每次使用时,请取出实验所需的MIRA反应单元的数量,置于冰浴条件下并在8小时内使用;剩余部分,请置于存储条件下。